Protein G Agarose/免疫沉淀(IP)/免疫共沉淀(Co-IP)
Protein G Agarose
&产品编号: P2009
&产品包装: 2ml
&产品价格: 485.00元
产品简介：
&&&&本Protein G Agarose为进口分装，主要用于免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP)或免疫共沉淀
(Co-IP)，也可以用于抗体的纯化。
&&&&Protein G Agarose适合于免疫沉淀mouse IgG1，IgG2a, IgG2b, IgG3, rat IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG2c, rabbit and goat polyclonal Abs, 以及human IgG1, IgG2, IgG3和IgG4。
&&&&Protein G共价交联到4% agarose beads上，2ml Protein G Agarose中共含有约2mg重组的Protein G。2 ml Protein G Agarose共可以结合约11mg human IgG。
&&&&Protein G Agarose配制在TBS溶液中，2ml中共含有0.5ml Agarose beads。
&&&&本Protein G Agarose如果用于常规的免疫沉淀，可以免疫沉淀100次。
包装清单：
Protein G Agarose
1ml/管，共2管
保存条件：
&&&&4℃保存，一年有效。
注意事项：
&&&&请勿冷冻保存本产品。
&&&&Protein G Agarose使用前一定要充分重悬，即充分颠倒若干次使混合均匀。
&&&&从蛋白样品收集开始，所有步骤中蛋白样品都必须在4℃或冰上操作。
&&&&为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1.免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP)：
&&A.蛋白样品的准备：
&&&&A1.对于10厘米细胞培养皿中的贴壁细胞，吸除细胞培养液，PBS洗涤一次，然后加入500微升至2毫
&&&&&&&升细胞裂解液裂解细胞。可以使用碧云天生产的或各种等进行细胞的裂解。
&&&&A2.对于组织样品参考贴壁细胞使用裂解液的比例进行裂解。
&&&&A3.对于悬浮细胞，离心收集细胞后，PBS洗涤一次，然后参考贴壁细胞的裂解方法进行裂解。
&&&&注： 详细的裂解方法参考不同裂解液的详细使用方法。对于不同的培养器材，参考10厘米培养皿的
&&&&&&&& 裂解液的用量进行裂解。如果裂解获得的蛋白样品浓度过高，可以用裂解液或PBS适当稀释，
&&&&&&&& 如果蛋白样品浓度过低，在以后的裂解过程中宜适当减少裂解液的用量。
&&B.去除非特异性结合(可选做)：
&&&&B1.取200微升至1毫升蛋白样品，蛋白量约为200微克至1毫克，加入约1微克和免疫沉淀时使用的IgG
&&&&&&&种属相同的普通IgG和20微升充分重悬的Protein G Agarose，4℃缓慢摇动30分钟至2小时。
&&&&B2.2500rpm(约1000g)离心5分钟，取上清用于后续的免疫沉淀。
&&&&注：所谓种属相同的IgG是指，例如后续免疫沉淀时用的是小鼠IgG，则在本步骤中可以加入normal
&&&&&&&mouse IgG，如无normal IgG可以加入其它不影响后续检测的其它mouse IgG类型的抗体。通过和
&&&&&&&normal IgG和Protein G Agarose的孵育，可以充分降低非特异性的结合，降低背景。
&&C.免疫沉淀：
&&&&C1.加入0.2-2微克用于免疫沉淀的一抗，4℃缓慢摇动过夜。
&&&&C2.再加入20微升充分重悬的Protein G Agarose，4℃缓慢摇动1-3个小时。(为方便后续的洗涤操作
&&&&&&&可以把加入充分重悬的Protein G Agarose的量调整为40微升。)
&&&&C3.2500rpm(约1000g)离心5分钟，或瞬时高速离心，小心吸除上清，注意宁可留下少量上清也不能
&&&&&&&吸掉Protein G Agarose。
&&&&C4.用准备蛋白样品时的裂解液或PBS洗涤沉淀5次，裂解液或PBS的用量每次为0.5-1毫升。洗涤时离
&&&&&&&心条件和吸除上清的要求同上面的步骤C3。
&&&&C5.完成最后一次洗涤后，去除上清，加入20-40微升1XSDS-PAGE电泳上样缓冲液Vortex重悬沉淀，
&&&&&&&瞬时高速离心把样品离心至管底。
&&&&C6.100℃或沸水浴处理3-5分钟，取部分或全部样品用于SDS-PAGE电泳，暂时不用的样品可以-20℃
&&&&&&&保存。
2.免疫共沉淀：
&&&&参考免疫沉淀的方法进行，但免疫共沉淀(co-IP)通常必须使用未经冻存的新鲜蛋白样品。普通的免疫沉淀虽然可以使用冻存的蛋白样品，但也宜用新鲜的蛋白样品为佳。
3.抗体纯化：
&&A.准备工作：
&&&&A1.用0.45微米或0.2微米孔径的滤膜过滤所用的溶液。
&&&&A2.所有的溶液必须用超声等方法脱气(degas)。
&&&&A3.选择适当的纯化柱，用适当量的Protein G Agarose装填纯化柱。
&&&&A4.用10-20倍柱体积的TBS洗涤并平衡纯化柱，流速可以用恒流泵控制为1ml/min。如无恒流泵，也
&&&&&&&可以完全依靠重力洗涤并平衡纯化柱。
&&B.抗体纯化：
&&&&B1.把含有待纯化的抗体上样到纯化柱。
&&&&B2.待纯化的抗体过柱后，用10-20倍柱体积的TBS洗涤，以去除未结合和非特异性结合的蛋白。洗涤
&&&&&&&是否完全可以通过测定280nm的吸光度进行确定。
&&&&B3.洗涤完后，用10ml 50mM glycine， pH2.7作为洗脱液，洗脱结合的抗体。某些抗体和Protein G
&&&&&&&的结合能力很强，在pH2.7时洗脱效果不太理想，可以使用50mM glycine， pH1.9作为洗脱液。
&&&&&&&分管收集洗脱下的抗体，根据蛋白浓度或后续的检测效果确定洗脱峰在哪几个收集管中。
&&C.纯化柱的再生：
&&&&C1.用10-20倍柱体积的TBS洗涤纯化柱，使纯化柱达到中性的pH。
&&&&C2.用TBS来保存再生的纯化柱。
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使用本产品的相关论文：
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