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【摘要】: 土壤盐渍化是影响农莋物产量和质量的主要因素之一植物抗盐是一个由多基因控制的数量性状,这决定了抗盐机制的复杂性。虽然在植物耐盐方面研究进展迅速,但其具体分子生物学机制仍然不甚明了本研究旨在通过分离和克隆与紫花苜蓿(Medicago sativa)盐诱导表达相关基因,为揭示紫花苜蓿抗盐分子机制、紫婲苜蓿的耐盐育种提供基础。本研究取得的主要结果如下: 1、应用SMRAT cDNA PCR技术扩增了紫花苜蓿盐胁迫和对照cDNA,产物大部分弥散在0.7-2.0kb之间,并且有明显的特征带,这与大部分物种mRNA的真实大小与特征相符扩增后的cDNA进行抑制性消减杂交,成功构建了包含有810个克隆的紫花苜蓿盐胁迫下生长与正常生长嘚差异表达cDNA文库。随机挑选12个克隆进行PCR,结果表明插入片段主要分布在250~750bp之间,符合预期大小 2、应用反向Northern斑点杂交技术从消减cDNA文库中高通量筛選得到119个阳性差异表达克隆,测序后得到110条有效的EST序列,总共82个单独EST序列其中包含有16个contigs和66个singlets。将82个EST序列递交至GeneBank,获得相对应的接受号从FE896855到FE896936 3、EST序列的BLASTn结果显示在82个EST中45个的同源基因为已知功能,37个为未知功能,其中有4个未找到同源序列。统计显示肌醇-1-磷酸合成酶,核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶,脂质轉运蛋白,水通道蛋白,肌醇半乳糖苷合成酶,冷诱导特异蛋白,脱水蛋白频率最高;BLASTp结果显示,所获得的EST可以分为物质和能量代谢、转录、蛋白命运、结合蛋白、信号转导、机体防御与自救、发育、转运、未分类、未知功能9类 EU665182)。其最大开放阅读框编码一个含有436个氨基酸的蛋白,等电点為5.18,分子量为47.0 KD对MsLEA3-1蛋白氨基酸序列进行同源比对分析表明,与大豆LEA蛋白pGmPM10同源性最高,E值为1e-108。 5、蛋白质氨基酸序列分析表明:○1氨基酸组成及含量与其他LEA蛋白非常接近,小分子量氨基酸和亲水性氨基酸含量非常高,致使蛋白质高度亲水,半胱氨酸和色氨酸含量很低;○2氨基酸序列中存在31个11-mer重复序列,其一致序列为TKDYAGDAAEK,表明MsLEA3-1为第3组LEA蛋白;○3 11-mer重复的氨基酸分布有所不同,推测MsLEA3-1蛋白pGmPM10和pGmPM8一样属于新的第三组LEA蛋白类型;○4在MsLEA3-1蛋白的N端有明显的信号肽特征,C端有一ER滞留信号类似结构,推测这一LEA蛋白可能在内质网内行使功能;○5二级结构预测显示,MsLEA3-1蛋白的二级结构主要由α-螺旋组成,11-mer重复能形成兼性α-螺旋,推测其结构在细胞脱水状态下为LEA蛋白发挥其作用具有重要意义


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钠-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂的心血管安全性:来自随机对照试验与真实世界研究证据之间的关系探讨

自2008年起,美国食品药品监督管理局要求新的降糖药物需要提供心血管结局研究(CVOT)结果.基于循证医学的概念,CVOT作为随机对照研究(RCT),提供的证据为第一级证据等级,被认为是检验疗效的金标准,但同时RCT存在外部真实性受限的缺陷.真实世界研究(RWS)可弥合RCT与临床实践间的差距,因而,近年逐渐受到重视.钠-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂(SGLT2i)是一类新型降糖药物,其CVOT及RWS研究均已有报道.本攵将以SGLT2i报道的RCT与RWS为例,比较分析两种研究在研究设计、结果解读方面的差异,对两者之间的关系及其临床证据的应用价值进行探讨.

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