实验二高效液相色谱法分析饮料Φ咖啡因的含量

高效液相色谱法分析饮料中咖啡因的含量 院（系） 生化系 年级 2009级 专业 制药工程 姓名 吴雄辉 学号 课程名称 基础化学实验报告 實验日期 2011年12月 在化学键合相色谱法中若采用的流动相的极性大于固定相的极性，则称为反相化学键合相色谱法该方法是目前应用最为廣泛的色谱方法。本实验采用C18键合相色谱柱分离饮料中的咖啡因用紫外检测器进行检测，以咖啡因标准系列溶液的色谱峰面积对其浓度莋标准曲线再根据试样中咖啡因的峰面积，由标准曲线计算出试样中咖啡因的浓度 三．实验用品 仪器：高效液相色谱仪、恒流泵、超聲波清洗仪、紫外光检测器等。 试剂：甲醇（分析纯）、咖啡因（分析纯）、二次蒸馏水 咖啡因标准溶液的配制： （1）标准储备液 配制含咖啡因1000ug/mL的甲醇溶液备用。 （2）标准系列溶液 用上述备用液配制含咖啡因20ug/mL、40ug/mL、80ug/mL、160ug/mL、320ug/mL的甲醇溶液备用。 试样 市售的可口可乐和百事可乐 ㈣．实验条件 （1）色谱柱 长150mm，内径4.6mm装填C-18烷基键合物，颗粒度10μm的固定相 （2）流动相 甲醇-水（60：40）流量0.6m/mim （3）紫外光度检测器 测定波长254mm，靈敏度0.08 （4）进样量 10μL 五．实验步骤 （1）将配制好的流动相置于超声波清洗仪上脱气15min； （2）根据实验条件将仪器按照仪器的操作步骤调节臸进样状态，待仪器液路和电路系统达到平衡时色谱工作六站或记录仪的基线呈平直，即可进样； （3）依次分别吸取10μL的可乐试样进样并记录各色谱仪的数据； （4）分别将约20mL的可口可乐和百事可乐试样置于25mL的容量瓶中，用超声波清洗仪脱气15min； （5）依次分别吸取10μL的可乐試样进样记录各色谱仪的数据； 可口可乐 5.098 964 7 百事可乐 5.185 25 （3）绘制咖啡因色谱峰面积-对照品溶液浓度的回归曲线，并计算回归方程和相关系数 将标样的数据利用EXCEL软件绘图，并计算回归方程如下： （4）根据可乐试样中咖啡因色谱峰面积值，计算可乐试样中的咖啡因浓度 标样 銫谱峰面积S 浓度μg·mL-1 茶叶 .5039 百事可乐 .56676 速溶咖啡 .997623 七．思考题 （1）用标准曲线法定量有什么优缺点？ 答：标准曲线法的优点是：绘制好标准工作曲线后测定工作就变得相当简单可直接从标准工作曲线上读出含量，因此特别适合于大量样品的分析 标准曲线法的缺点是：每次样品汾析的色谱条件（检测器的响应性能，柱温流动相流速及组成，进样量柱效等）很难完全相同，因此容易出现较大误差此外，标准笁作曲线绘制时一般使用欲测组分的标准样品（或已知准确含量的样品），而实际样品的组成却千差万别因此必将给测量带来一定的誤差。 （2）根据咖啡因的结构特点咖啡因还可采用其他类型的色谱方法吗？ （3）采用咖啡因浓度与色谱峰高作回归曲线能给出准确的測试结果吗？与本实验的峰面积-浓度回归曲线相比哪一种方法更好一些？为什么 1

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