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前段时间！睾丸疼痛！到成都第一人民医院做
健康咨询描述：
前段时间！睾丸疼痛！到成都第一人民医院做了个像比超的检查！医生看了报告说我得了前列腺炎！开了五盒前前段时间！睾丸疼痛！到成都第一人民医院做了个像比超的检查！医生看了报告说我得了前列腺炎！开了五盒前列倍喜，头饱克肟分散片，还有个镇疼的！吃完了没疼了可是感觉小便黄，阴囊部不舒服！潮湿，性欲不好求个位医生帮帮忙！该咋办啊！我才23岁啊！🙏🙏🙏
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伊春市南岔区中医院&& 副主任医师
擅长: 精索静脉曲张,泌尿系感染,前列腺炎,包皮过长,尿路
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&&&&&&指导意见：&&&&&&这种情况考虑前列腺炎引起的可能性大，可以口服前列舒通治疗，注意日常调理是重点，多喝水，勤排尿，注意休息，适当运动，避免受凉，不要久坐，不骑车，不憋尿，避免过度性生活和手淫，少食辛辣刺激性食物，少烟酒等。
擅长: 内科，妇科，妇产科，宫颈糜烂，子宫肌瘤
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&&&&&&病情分析：&&&&&&您好,前列腺炎多发与那些因为经常有性交活动而容易得性病的男性。&&&&&&指导意见：&&&&&&前列腺炎病有症状复杂，病程迁延、顽固难愈、容易复发等特点。传统医学应用清利湿热、热毒通淋法多能奏效养成及时排尿的习惯，因为憋尿可使尿液反流进入前列腺。养成良好的生活习惯，不吸烟、少饮酒。
副主任医师
擅长: 对胃炎，胃溃疡，胆囊炎，高血压病，糖尿病，脑梗塞，
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&&&&&&病情分析：&&&&&&这还合并有睾丸炎，首先的注意多喝水，吃点消炎泻火，壮阳补肾的就可以改善，&&&&&&指导意见：&&&&&&可以吃点头孢克肟，三金片，参松温阳胶囊合用就可以改善&&&&&&以上是对“前段时间！睾丸疼痛！到成都第一人民医院做”这个问题的建议，希望对您有帮助，祝您健康！
疾病百科| 前列腺炎
挂号科室：泌尿科、男科
温馨提示：多饮水，不憋尿，节制性生活。
前列腺炎是由于前列腺受到致病菌感染和(或)某些非感染因素刺激而出现的骨盆区域疼痛或不适、排尿异常等临床表现。前列腺炎是成年男性的常见疾病，且50岁以下成年男性患病率较高，有资料显示前列腺炎患者占泌尿外...
好发人群：成年男性
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是否医保：医保疾病
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本帖最后由 derbyking 于
16:15 编辑
趋于完美，HP Spectre XT安装OS X EL Capitan 10.11.5分享
我的HP Spectre XT笔记本2013年生产，外形与苹果电脑非常相似，安装OS X系统可谓天作之合。经过多日的努力，终于用上了OS X系统，因此有必要分享一下其中的艰辛。
一、电脑配置
&&&&型号&&
惠普 InsydeH2O EFI&&BIOS 笔记本电脑&&(&&SpectreXT Pro 13b000 )
&&&&处理器&&
英特尔 第三代酷睿 i5-3317U&&@&&1.70GHz 双核 超低电压处理器
&&&&主板&&
惠普 1888 ( 英特尔 Ivy Bridge - HM76&&Express 芯片组 )
&&&&BIOS&&
版本F.26，制造日期: 日
&&&&显卡&&
英特尔 HD Graphics&&4000 ( 32&&MB / 惠普 )
&&&&内存&&
&&&&主硬盘&&
镁光&&MTFDDAT128MAM-1J2 ( 128&&GB / 固态硬盘 )
&&&&显示器&&
LG LGD0368 ( 14 英寸&&)
&&&&声卡&&
IDT&&@&&英特尔&&Panther&&Point High&&Definition Audio Controller
&&&&声卡ID&&
IDT 92HD99BXX，设备 ID：111d76e5
&&&&网卡&&
瑞昱&&RTL12&&Gigabit Ethernet&&Controller / 惠普
&&&&无线&&
英特尔 Centrino&&Advanced-N&&6235 AGN
&&&&键盘&&
PS/2 标准键盘
&&&&鼠标&&
Synaptics SMBus ClickPad
&&&&摄像头&&
HP Truevision HD
HP Spectre XT和OS X系统还是很般配的。这几天一直在使用OS X系统，包括此文档也主要是在OS X下撰写，充分体会到了OS X系统作为强大的生产力工具的不凡，从开始只是想玩玩，到最后OS X已变成日常的主要系统。
二、安装前准备安装OS X涉及的概念和配套工具很多，要提前从论坛搜索学习一下，比如：启动盘制作、原版系统、懒人版系统、流行的Clover、以前的变色龙、Clover的目录结构、plist文件、bios、EFI、GPT、MBR、SLE、v图、kext、DSDT、SDST、修改权限、重建缓存……，这些都是一些基础知识，必须花些时间了解，否则会无从下手。其中的启动盘制作必须掌握。这些知识和内容不是本文论及的重点，因此，以下假定你已初步具备这些知识。安装前，请下载原版10.11.4镜像及制作Clover启动安装盘的各类工具。我们的目的是安装目前最新的10.11.5版，为什么不直接下载该版本？原因是我在安装另一台T410s时，只要是10.11.5的版本在执行安装到最后一秒时就会报错退出，而安装10.11.4就没问题，据说是10.11.5加强了安全措施，反正，10.11.4安装后，再花几分钟，通过系统的App Store一般均可无痛升级到10.11.5。由于需要重新把硬盘格式化为gpt盘，所以安装前还需要做好重要数据的备份，如何把原版系统安装到gpt分区需要用到很多技巧，由于我已经安装成功，经验证，使用我做好的EFI，在Clover的安全模式下可正常安装，省略了安装系统的烦恼。如果要装双系统，磁盘分区一般划分为四个以上，分别为：EFI分区，需大于300M，据说，如太小装OS X会抹不了盘，我分的是640M；MSR分区，128M，此分区微软保留，安装微软系统必须分配；windows分区，一般需要35G；exFAT的数据分区，35G，此格式的分区微软和OS X均支持读写，用于两个系统共享；最后一个分区是NFS+，最好大于50G，用于安装OS X系统，我是把剩余空间全部划分给OS X系统。电脑的bios也要做相应设置，具体为按F10进入bios，先按F9存储默认设置，然后把启动方式改为非传统启动，usb3可改为启动。我的bios版本为官网最新的F.26，DSDT是基于此bios制作，请检查自己的bios版本，最好升级到此版本，以避免无法预料的问题。
三、DSDT提取要想打造完美系统，一般都要涉及四方面的修改，一是DSDT的修改，二是Clover配置文件config.plist的修改，三是新增kext，四是修改系统原代的kext。一般的原则是能通过DSDT和Clover修改完成的就不要通过新增或修改kext完成，这样做的好处至少有两点，一是避免了OS X升级对修改后的驱动的覆盖，二是尽最大可能保持原版系统的完整性，以避免不可预料的风险。关于DSDT的提取，用Clover在启动后按F4提取DSDT最便捷，提取的原版DSDT在Clover的ACPI/origin目录中，文件名为DSDT.aml，相关的SSDT文件名为SSDT1.aml、SSDT2.aml、……，按后面介绍的方法修改编译完毕的DSDT和SSDT应放在ACPI/patched目录。DSDT的编译修改工具可在OS X下用MaciASL进行，强烈推荐。如果没有OS X环境也可在windows下使用java版的DSDTEditor进行，两者使用方法大同小异，工具请自行搜索下载。修改时用到的最新MaciASL及其补丁包下载和补丁包源地址如下：https://bitbucket.org/RehabMan/os-x-maciasl-patchmatic/downloadshttps://github.com/RehabMan/Laptop-DSDT-Patchhttp://raw.github.com/RehabMan/Laptop-DSDT-Patch/master在修改DSDT之前，首先要对提取的DSDT编译改错，本例中我已修改为无报错仅余一个不好改的报警，我就不改了，怕改错。
四、相关修改准备好各类工具，DSDT报错修改后，就可开始正式修改了。共有近20项修改，历经艰辛，苦尽甘来。下文中的“Patch XXX”意为“用DSDT编辑工具打XXX补丁，XXX为补丁的名字”，比如，“Patch [igpu]HD4000 Low Resolution”，表示，为DSDT打上命名为“[igpu]HD4000 Low Resolution”的补丁。苦难历程就此展开。
1、网卡驱动，可在瑞昱官网下载到驱动，操作步骤为：－ 进入官网http://www.realtek.com.tw－ 数据搜寻RTL8168－ 点击下载中心带有RTL8168的第三行链接－ 翻到页面底部找到MacOS 10.7 onIntel-based Mac computer行，点击Global下载该驱动
2、显卡驱动，Patch [igpu]HD4000 LowResolution，驱动集成的HD4000显卡。
3、声卡驱动，Patch [audio] Audio Layout 12，并下载修改后的AppleHDA.kext，具体如下：要驱动声卡，主要方法就是修改原版驱动进行仿冒，在osx86网站发现了适合IDT92HD99BXX (0X111D76E5)的驱动，首先，进入http://www.osx86.net/files/file/3618-idt-92hd99bxx-0x111d76e5/然后，下载AppleHDA.kext v2.3.7，文件名为Audio.zip，解压后有两个驱动AppleHDA.kext和IoAudioFamily.kext，把这两个驱动安装到SLE下，替换系统原带驱动，修改权限重建缓冲，重启后声音正常驱动。经使用，该驱动还是比较完美的，睡眠唤醒后声音如常，键盘上的音量调节键也全部正常。
4、Patch [sys]HPET fix
5、Patch [sys]SMBUS fix
6、Patch [sys]IRQ fix
7、Patch [sys]RTC fix
8、Patch [sys]OS Check fix(Windows 8)
9、Patch [sys]Fix Mutex withnon-zeroSyncLevel，此项，用windows的修改工具耗时很长，等了快20分钟都不见做完，因此就中断了，可能是该java工具有bug，也可能是再等一会儿就可做完，不再深究。用MaciASL工具后，很快就可做完，这也是推荐大家使用该工具的原因。
10、Patch[sys]Fix PNOT/PPNT
11、Patch [sys]Add IMEI
12、Patch [sys]Fix_WAK Arg0 v2
13Patch[igpu]Rename GFX0 to IGPU，把GFX0改为IGPU，据说可加载集成显卡的电源管理。
14、电池电量显示，Patch [bat]HP Spectre XT，下载ACPIBatteryManager.kext，相关资源如下：http://www.tonymacx86.com/threads/guide-how-to-patch-dsdt-for-working-battery-status.116102/https://bitbucket.org/RehabMan/os-x-acpi-battery-driver/downloads
15、USB驱动，Patch [usb]7-series/8-seriesUSB
16、USB 3.0驱动，Patch [usb]USB3_PRW0x0D(instant wake)以上15、16两项和USB相关的补丁打好后，还要下载安装驱动USBInjectAll.kext，说实话，完美驱动USB是非常复杂的一个话题，我只是打了以上补丁，安装了相关驱动，看到U盘、摄像头等仍然正常工作就没有再深究，是否完美驱动，甚至我这个电脑是否有3.0的口，心中着实无底。我的电脑有两个USB插口，全是黑色的，而系统配置中又能看到USB 3.0相关的内容，不明觉厉。相关资源如下，请参考。http://www.tonymacx86.com/threads/guide-10-11-usb-changes-and-solutions.173616/https://bitbucket.org/RehabMan/os-x-usb-inject-all/downloads
17、显示器亮度调节滑块，Patch [igpu]Brightnessfix(HD3000/HD4000)至少有三种方法实现电池电量的正常显示，第一种是使用ACPIBacklight.kext；第二种是下载PatchAppleBacklight_v2生成注入补丁，或直接用新生成的AppleBacklight.kext；第三种是使用IntelBacklight.kext。这三者的共同点是都要打以上补丁。第一种方法较老，好像不太适用新的10.11.x版了，后两种比较新，均可使用，我用的是第二种。第二种方法请参考以下地址：http://www.tonymacx86.com/threads/native-brightness-working-without-blinkscreen-using-patched-applebacklight-kext.121031/执行步骤如下：－ 下载解压PatchAppleBacklight_v2.zip－ 在解压所在目录建子目录vanilla－ 从SLE拷贝原版AppleBacklight.kext到vanilla目录－ 通过终端，cd进入解压目录，运行其中的sh脚本，./patch.sh－ 解压目录新生成patched目录，其中有两个文件，AppleBacklightInjector.kext和AppleBacklight.kext－ 把AppleBacklightInjector.kext拷入SLE，或，不拷该文件，直接用新生成的AppleBacklight.kext替换SLE中的原版，修改权限重建缓冲即可，我用的是前者。
18、亮度调节快捷键的设置- usb键盘设置法打了上面的PNLF补丁[igpu]Brightnessfix(HD3000/HD4000)后，在“系统偏好设置－显示器”中就会出现亮度滑块，并可用鼠标正常调节。如何映射键盘的快捷键是另外的问题，映射的方法有很多但大多都非常复杂，困扰了很久终于搜索到了最简单的方法，“usb键盘设置法”，前提是你要有一个usb键盘，不要被吓住，此类键盘很常见，找一找说不定你们家就有，台式机上的键盘不管是有线的还是无线的有很多是此类键盘，实在没有就借一个用一下，几分钟就好。把usb键盘接入OS X系统后，在“系统偏好设置－键盘－快捷键”中会出现显示器亮度调节的快捷键，不接usb键盘此调节键不会出现，自行设置一个即可，我设的分别为F2和F3，windows下是F2键上的小太阳和F3键上的大太阳，正好相反，但F2和F3的使用也非常完美。如果有强迫症，必须要用键盘上的小太阳和大太阳键调整亮度，请继续读下面的内容。否则的话直接跳到下一节。
19、亮度调节快捷键的设置-完美映射法上一节中为什么不直接映射成键盘上的小太阳和大太阳键，因为这两个键生成的是ACPI事件，在OS X中无法通过上述方法映射。相关知识可参阅此贴：http://bbs.pcbeta.com/viewthread--1.html经过复杂的操作，包括增加调试代码，插入调试补丁，确认EC查询等步骤，终于确认了，我的笔记本的这两个键的ACPI事件代码为_Q11和_Q12，在DSDT中找到这两个事件出现的位置分别加入以下代码_Q11处插入：Notify(\_SB.PCI0.LPCB.PS2K,0x0205)Notify(\_SB.PCI0.LPCB.PS2K,0x0285)
_Q12处插入：Notify(\_SB.PCI0.LPCB.PS2K,0x0206)Notify(\_SB.PCI0.LPCB.PS2K,0x0286)
DSDT修改好后，拷入相应位置，重启电脑，小太阳键和大太阳键完美使用，同时，用“usb键盘设置法”定义的亮度调节按钮也正常使用，互不影响。
以上就是所有的修改，根据我的实践，前三项修改完毕后即可正常使用，但为了趋于完美，后面的应都修改一下，以避免不可预料的错误。
五、总结以上内容较为繁多，大部分是我的经验分享，供类似机型借鉴参考，如果你与我一样拥有HP SpectreXT Pro，那就简单了，只需要按以下步骤操作即可，不一定严格按如下顺序进行，但要确保第6步在第5步后执行，避免修改的驱动因升级覆盖：1、制作10.11.4原版安装盘，下载我做好的EFI，覆盖安装盘中的EFI；2、确认bios是F.26，不是的话请先更新，bios设为非传统启动；3、硬盘用GPT格式分区，建立EFI分区、MSR分区及相关系统安装分区；4、启动安装盘，在硬盘上安装10.11.4系统。一般地，安装系统时的Clover配置和安装后的配置是不同的，经验证，在本例做好的EFI下通过Clover的安全模式可正常安装系统，极大地方便了新手，也许你有更好的方法把系统装上；5、系统装好并进入后，要先安装网卡驱动，然后联网用App Store升级系统为10.11.5；6、把本例的EFI中，EFI/CLOVER/kexts/10.11目录下除FakeSMC.kext之外的其它驱动都拷入SLE，修复权限重建缓冲，此时，10.11目录下的对应驱动理论上就可以删除了，不过最好别删，以备某些原因SLE目录下的未加载时，加载此处的，双保险；7、重启，开始享受。
最后，如果要通过本地硬盘的EFI分区启动，可通过工具在EFI分区安装最新版Clover，并用我的EFI替换或覆盖其中内容。此部分内容就不介绍了，自行搜索吧！
六、致谢感谢论坛提供的平台，各位管理员辛苦！安装期间大量翻阅本论坛的帖子，受益非浅，对各位坛友的无私分享表示感谢！tonymacx86网站的Rehabman大神提供了海量资源，包括教程、驱动、工具等等，几乎把苹果的这点事全部都做了，在此尤其表示感谢！大神的论坛我将不时光顾，你我虽天各一方，但互联网使我们没有了距离……
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全部EFI等资源已上传百度网盘。
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感谢分享&#128591;&#128591;&#128591;&#128591;
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谢谢分享！！！！！！！！！！
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不错，以后可能用到。
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好，我也装好
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sjjl2000 发表于
好，我也装好
装吧，使用体验非常好。
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个人支持华硕
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leibb 发表于
个人支持华硕
HP的也不错，产品多样化。打印机、笔记本、pc、服务器等做工都不错。
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derbyking 发表于
HP的也不错，产品多样化。打印机、笔记本、pc、服务器等做工都不错。
嗯嗯 哈哈& &哈哈
积分333最后登录精华0阅读权限30主题UID4234846帖子PB币570 威望0 贡献0 技术2 活跃721
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完全就是山寨版
积分206最后登录精华0阅读权限30主题UID618905帖子PB币489 威望5 贡献0 技术5 活跃762
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不错？！我也打算买个超薄本然后黑苹果的
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lairui1111 发表于
完全就是山寨版
高仿，新款外形已发生变化
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dumpling333333 发表于
不错？！我也打算买个超薄本然后黑苹果的
可选购一款兼容性好的
积分151最后登录精华0阅读权限20主题UID727096帖子PB币0 威望5 贡献0 技术0 活跃83
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个人支持华硕
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祝贺 我的还在完美的路上
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請問LZ的本本觸摸板可以多指嗎？有Synaptics SMBus觸摸版的驅動嗎？
我的觸摸版跟LZ一樣，但是使用了ApplePS2SmartTouchPad.kext後觸摸版碰一下就會亂跳，無法使用！
使用原本的ApplePS2Controller正常，但是只能單指。
請LZ指教，謝謝！
积分4最后登录精华0阅读权限10主题UID3428518帖子PB币25 威望0 贡献0 技术0 活跃16
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谢谢分享& && &
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不用试剂盒扩5’3’求指教！已有1人参与
最近在看有关5’、3’克隆的东西，据说可以不用试剂盒进行克隆，大概意思是在反转录的时候加个什么引物就可以获得用于后期克隆的模版。可是这个原理是什么一直搞不明白，这种加接头是普通反转录酶就能实现吗？比如takara的反转录试剂盒就可以实现吗？那加接头的原理是什么呢？求路过的大神指教！！万分感谢&#128591;&#128591;&#128591;
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★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ...感谢参与，应助指数 +1zljuile0713: 金币+100, ★★★★★最佳答案
对于RACE来说，5末端相对要比3端难得到的多，有一种经典3‘race的方法
所需引物：
QT：CCAGTGAGCAGAGTGACGAGGACTCGAGCTCAAGCTTTTTTTTTT TTTTTTT
Q0：CCAGTGAGCAGAGTGACG（是QT前面的一部分）
Q1：GAGGACTCGAGCTCAAGC
（是QT中间的一部分）
基因特异性引物：GSP1，GSP2& && &&&（正向引物）
以QT引物替代平时用的Oligo dT引物进行反转录得到cDNA第一链，以Q0引物与GSP1进行外向PCR，以Q1引物与GSP2进行内向PCR，这样就能得到目的片段,琼脂糖检测连T载体测序即可。
这种方法其实就是很多分子生物学书的经典RACE的方法，其实5-RACE也可以这样做，就是反转录后在cDNA第一链末端加上A,然后就可以用QT,Q0,Q1分两次进行巢式PCR就行,我用这种方法已经得到好几个全长基因了.
另外,这种方法对RNA的质量要求也不是很高,我提的RNA质量就不太好,只要主带明显,没有DNA残留就可以,稍微有些降解也没有问题.
一般来说做race比较好的试剂盒是smart，但是比较贵，下面是它的步骤：
First-strand Synthesis
SMART II A Oligonucleotide (10 μM)
5'–AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTACGCGGG–3'
3'-RACE CDS Primer A (3'-CDS; 10 μM)
5'–AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTAC(T)30N-1N–3'
(N = A, C, G, or T; N-1 = A, G, or C)
5'-RACE CDS Primer (5'-CDS;10 μM)
5'–(T)25N-1N–3'
(N = A, C, G, or T; N-1 = A, G, or C)
Long (0.4 μM):
5'–CTAATACGACTCACTATAGGGCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT–3'
Short (2 μM):
5'–CTAATACGACTCACTATAGGGC–3'
Nested Universal Primer A (NUP; 10 μM)
5'–AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT–3'
Primer Sequence
Gene-Specific Primers (GSPs) should be:
m ≥ 65°C; best results are obtained if Tm & 70°C (enables the use of
touchdown PCR)
1. Combine the following in seperate 0.5-ml microcentrifuge tubes:
For preparation of For preparation of
5'-RACE-Ready& && && && && & cDNA 3'-RACE-Ready cDNA
1–3 μl RNA sample& && && &&&1–3 μl RNA sample
1 μl 5'-CDS primer& && && && &1 μl 3'-CDS primer A
1 μl SMART II A oligo
2. Add sterile H2O to a final volume of 5 μl for each reaction.
3. Mix contents and spin the tubes briefly in a microcentrifuge.
4. Incubate the tubes at 70°C for 2 min.
5. Cool the tubes on ice for 2 min.
6. Spin the tubes briefly to collect the contents at the bottom.
7. Add the following to each reaction tube (already containing 5 μl):
& &&&2 μl 5X First-Strand buffer
& & 1 μl DTT (20 mM)
& & 1 μl dNTP Mix (10 mM)
& & 1 μl PowerScript Reverse Transcriptase
& & 10 μl Total volume
8. Mix the contents of the tubes by gently pipetting.
9. Spin the tubes briefly to collect the contents at the bottom.
10. Incubate the tubes at 42°C for 1.5 hr in an air incubator.
11. Dilute the first-strand reaction product with Tricine-EDTA Buffer:
12. Heat tubes at 72°C for 7 min.
13. Samples can be stored at –20°C for up to three months.
你可以参照其3’race，设计引物。但是5‘race，需要你买特殊的反转录酶M-MLV Reverse ,具有在末端加CCC的特征，试剂盒中的SMART II A Oligonucleotide是RNA，可以用单链的DNA代替，即合成普通的引物就行。
还有一种是在DNA水平在扩5’末端，然后自己分析去除内含子（Liu and Chen 2007）
用的热不对称法根据克隆得到的苹果蠹蛾PBP2基因cDNA片段序列，以待扩增的5'末端为方向设计3条嵌套的特异性引物，引物RB-1设计位置在RB-0内侧，RB-2位于RB-1内侧，这3条引物分别为第1至第3轮反应的下游引物。引物LAD1到LAD4为上游简并引物，用于第1轮扩增的4个平行反应；AC1（Liu and Chen 2007）作为第2和第3轮扩增反应的上游引物。
LAD1& & & & ACGATGGACTCCAGAGVNVNNNGGAA
LAD2& & & & ACGATGGACTCCAGAGBNBNNNGGTT
LAD3& & & & ACGATGGACTCCAGAGVVNVNNNCCAA
LAD4& & & & ACGATGGACTCCAGAGBDNBNNNCGGT
AC1& & & & ACGATGGACTCCAGAG
RB0& & & & Sp1
RB1& & & & Sp2
RB2& & & & Sp3
整个TAIL-PCR反应过程分为3轮：预扩增反应（Pre-amplification）由10个高温循环、1个低温循环、25个较高温循环构成。前10个高温循环是单线性扩增，以增加特异模板的比例，随后的1个低温循环使简并引物结合到较多的目标序列上，25个较高温循环使两种引物均能与模板退火；第1轮反应（Primary TAIL-PCR）将上一轮反应的PCR产物稀释50倍作为模板，通过数次2轮高温、1轮低温的热不对称循环，使特异性产物被选择性地扩增，降低非特异性产物的比例；第2轮反应（Secondary TAIL-PCR）将上一轮反应的PCR产物稀释10倍作为模板，以普通的PCR反应或热不对称循环扩增特异性产物。反应体系及PCR反应具体程序如下：
（1）TAIL-PCR反应体系
Pre-amplification（20 ul）：10×Ex Taq Buffer（Mg2+ Plus）2.0 ul， dNTP Mix（各2.5 mM）2 ul，任1种LAD引物（20 uM）1 ul，引物RB-0（10 uM）1 ul，DNA模板1 ul，Ex Taq 酶（5 U/ul）0.2 ul，dd H2O补足至20 ul。
Primary TAIL-PCR（25 ul）：10×Ex Taq Buffer（Mg2+ Plus）2.5 ul， dNTP Mix（各2.5 mM）2 ul，引物AC1（10 uM）1 ul，引物RB-1（10 uM）1 ul，DNA模板（预扩增产物稀释50倍）1 ul，Ex Taq 酶（5 U/ul）0.25 ul，dd H2O补足至25 ul。
Secondary TAIL-PCR（25 ul）：10×Ex Taq Buffer（Mg2+ Plus）2.5 ul， dNTP Mix（各2.5 mM）2 ul，引物AC1（10 uM）1 ul，引物RB-2（10 uM）1 ul，DNA模板（上一轮扩增产物稀释10倍）1 ul，Ex Taq 酶（5 U/ul）0.25 ul，dd H2O补足至25 ul。
反应程序请参照：Liu Y G, Chen Y L. 2007. High-efficiency thermal asymmetric interlaced PCR for amplification of unknown flanking sequences. Bio Techniques, 43 (5): 649~656
(正式写手)
在线: 91.6小时
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5'得用TdT之类的
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