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求助猪组织中瘦肉精的提取方法
有人做过猪肉组织中瘦肉精（沙丁胺醇、克伦特罗）的提取方法吗？现在我遇到的问题是提取效率偏低，求高人指点！
我提取的是组织中的瘦肉精，比较了几种提取的方法，目前采用的是有机溶剂直接提取法，没有经过酶解，是不是因为这个原因，提取效率一直很低呢？
我刚刚去做了个提取实验，在有机溶剂里加了点氨水，瘦肉精呈分子形式，应该更易溶于有机溶剂吧，不知道效果怎么样
是课题，就是现成的提取方法效率都很低，只有50%左右，所以想改进，一篇外文文献上是用纯乙腈作为提取溶剂，但是效率还是低，理想的提取效率想做到80%
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共有&9&人回复了该问答求猪组织中瘦肉精的提取方法
帮朋友问：有人做过猪肉组织中瘦肉精（沙丁胺醇、克伦特罗）的提取方法吗？现在的问题是提取效率偏低，求高人指点！
回复于： 7:02:03具体可参见我的这篇原创：效果很好的
回复于： 15:46:56提取步骤称取5g已捣碎的样品于50ml离心管中，加入8ml乙酸钠缓冲液，充分混匀，再加50&Lβ-葡萄糖醛甙酶/芳基硫酸酯酶，混匀后，37度环境下酶解12h。添加100&L的10ng/mL内标工作液于待测样品中， 加盖置于水平振荡器上振荡15min，离心10min(5000r/min )，取4mL上清液加高氯酸调节pH值到1土0.3。5000r/min离心10min后，将全部上清夜转移到50ml的离心管中，用10mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值到11。加入10mL饱和氯化钠溶液和10ml异丙醇-乙酸乙酯(6+4)混合溶液，充分提取，在5000r/min下离心10min。转移全部有机相,在40℃水浴下用氮气将其吹干。加入5mL乙酸钠缓冲液,超声混匀,使残渣充分溶解后备用。将阳离子交换固相萃取小柱连接到真空过柱装置，然后将上述残渣溶液上柱，依次用5mL水、5mL的2%甲酸水溶液和5mL甲醇洗涤柱子并彻底抽干，最后用5mL的5%氨水甲醇溶液洗脱柱子上的待测成分。洗脱液在40℃水浴下氮气吹干。准确加入1ml的0.1%甲酸/水-甲醇溶液(95/5)，超声混匀。用0.22微孔滤膜过滤，上LC-MS/MS进行分析。SPE净化步骤净化SPE柱：Welchrom& P-SCX，60mg/3mLa 活化：依次加入5mL 甲醇和5mL水，流出液弃去；b 上样：将提取液加入Welchrom& P-SCX柱中，流出液弃去；c 淋洗：依次用5mL水，5mL 2%甲酸水溶液和5mL甲醇淋洗，淋洗液弃去；d 洗脱：6mL 5%氨水甲醇溶液洗脱，收集洗脱液；e 重新溶解：50&C下氮气吹干洗脱液，准确定容至1mL后用LC-MS/MS进行分析。
回复于： 11:12:52我看见别人处理过，很麻烦的
回复于： 13:47:35加入内标即可，回收率都能达到95%
快速回复【花三五分钟，帮别人解决一个问题，快乐自己一天！】
回复于： 6:34:18
我们有分析过，有没有加β-葡萄糖醛甙酶/芳基硫酸酯酶，该酶的酶活性？
回复于： 13:47:35
加入内标即可，回收率都能达到95%
回复于： 16:48:43
用内标可以弥补回收率低
回复于： 7:02:03
具体可参见我的这篇原创：效果很好的
回复于： 11:12:52
我看见别人处理过，很麻烦的
回复于： 15:46:56
提取步骤称取5g已捣碎的样品于50ml离心管中，加入8ml乙酸钠缓冲液，充分混匀，再加50&Lβ-葡萄糖醛甙酶/芳基硫酸酯酶，混匀后，37度环境下酶解12h。添加100&L的10ng/mL内标工作液于待测样品中， 加盖置于水平振荡器上振荡15min，离心10min(5000r/min )，取4mL上清液加高氯酸调节pH值到1土0.3。5000r/min离心10min后，将全部上清夜转移到50ml的离心管中，用10mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值到11。加入10mL饱和氯化钠溶液和10ml异丙醇-乙酸乙酯(6+4)混合溶液，充分提取，在5000r/min下离心10min。转移全部有机相,在40℃水浴下用氮气将其吹干。加入5mL乙酸钠缓冲液,超声混匀,使残渣充分溶解后备用。将阳离子交换固相萃取小柱连接到真空过柱装置，然后将上述残渣溶液上柱，依次用5mL水、5mL的2%甲酸水溶液和5mL甲醇洗涤柱子并彻底抽干，最后用5mL的5%氨水甲醇溶液洗脱柱子上的待测成分。洗脱液在40℃水浴下氮气吹干。准确加入1ml的0.1%甲酸/水-甲醇溶液(95/5)，超声混匀。用0.22微孔滤膜过滤，上LC-MS/MS进行分析。SPE净化步骤净化SPE柱：Welchrom& P-SCX，60mg/3mLa 活化：依次加入5mL 甲醇和5mL水，流出液弃去；b 上样：将提取液加入Welchrom& P-SCX柱中，流出液弃去；c 淋洗：依次用5mL水，5mL 2%甲酸水溶液和5mL甲醇淋洗，淋洗液弃去；d 洗脱：6mL 5%氨水甲醇溶液洗脱，收集洗脱液；e 重新溶解：50&C下氮气吹干洗脱液，准确定容至1mL后用LC-MS/MS进行分析。
回复于： 15:47:51
我把老师的方法复制过来了，这样方便看。
回复于： 22:41:53
你是按哪个方法来检测的？
回复于： 21:33:50
参照哪个标准做的呀？
未解决问题某市肉猪中瘦肉精残留的检测_图文_百度文库
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某市肉猪中瘦肉精残留的检测
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瘦肉精检测福建市民抢购瘦肉精检测卡 用法荒谬人尿也查
核心提示：自央视曝光双汇冷鲜肉使用瘦肉精后，近日，“瘦肉精检测卡”在网络上热卖，不少福州市民也去抢购。
　　自央视曝光双汇冷鲜肉使用瘦肉精，近日，“瘦肉精检测卡”在网络上热卖，不少福州市民也去抢购。据称，这些检测卡可通过简便快捷的方式检测出中是否含瘦肉精。这个外观长得像验孕棒一样的小东西，真的可以准确地检测出瘦肉精吗?
　　现象：
　　不少家庭赶购瘦肉精检测卡
　　记者在淘宝网上了解到检测瘦肉精的快速检测卡种类十分繁多，包括瘦肉精检测卡检测试纸等多种类型，价格从1元到720元不等。而且，一些商家还按照检测猪部位不同而出售不同类型的检测卡，包括检测猪尿、猪内脏、猪组织液或者猪饲料等不同类型。一些卖家还将商品特别标注为“央视3· 晚会推荐的瘦肉精快速检15测卡”。
　　这些检测卡外观看起来十分简单，类似超市所售的验孕棒。操作方法也极为简单，在加样孔中滴入3~4滴尿样或饲料/组织提取液后，再反应15分钟。
　　如果出现红色条带为阴性，反之则为阳性。卖家都在产品介绍中强调，这是目前检，测尿液、饲料、肉及内脏样本中瘦肉精含量最为快速的方法，、操作简便，一步便可完成检测。
　　不少商家称，家庭主妇可借用此检测卡，用手掐肉滴下的肉汁，来滴入加样孔，这样就能轻松在超市检测出有瘦肉精的猪肉。记者联系多位卖家，他们均表示，最近检测卡销售不错，以前都只有固定厂家来买，现在却更受家庭户的青睐和追捧。
　　当记者质疑10元左右的检测卡是否有效果时，几位卖家均称，这些检测卡都可以准确检测到猪尿样中是否含有瘦肉精，快速方便，适用于大型集贸市场、肉联厂、屠宰中心、超市等对瘦肉精残留进监控。产品所属技术已获农业部备案及国家标准认可。
　　卖家：
　　检测对象是猪尿 而不是肉汁
　　记者联系到泉州一网店店主，他告诉记者，这种瘦肉精检测卡其实并不是新玩意儿，只是最近才引起市民和家庭的关注。而这种检测卡，多数是通过检测猪的尿液来进行阴性和阳性的判断。他说，“不少商家称，可以把超市的肉滴下来的汁液放在检测卡上检测，其实这是不科学的。因为要检测的对象是猪尿，也就是说，放在超市的已经被宰杀的猪肉，是不适用的。”
　　不过，他告诉记者，检测卡最近确销。前段时间，有位顾客就向他买了十多个检测卡，用来检测自己的尿液。因为这位顾客很喜欢吃之类的肉制品，因此担心体内有瘦肉精残留，就买了很多来测试自己的尿液。
　　给猪检测的试纸或者检测卡，用在人身上可以吗?他告诉记者，如果平时猪肉吃得多且频繁的话，觉得自己的身体有点不舒服，可以试一下，因为其工作原理是一样的。但是，原本是检测猪尿的检测卡，如果检测人尿，需要灵敏度更高。
　　专家：
　　家庭自检可能会出现误差
　　售价仅几元的瘦肉精检测卡是否真的能起到检测效果?就此，记者咨询了省检验检疫局动植检科的有关专家。他告诉记者，目前最为准确的检测方法，是通过大型检测仪器来完成的。这种网上售卖的检测卡，只能起到初筛的作用。“这种试纸类的快速检测卡，有漏判的可能性，也有可能会出现‘假阳性’。”他说，就好像“早早孕”试纸一样，都存在一定比例的误差值，所以可能会出现“假阳性”或“假阴性”。
　　家庭主妇用检测卡检测挤出来的肉汁，是否就能准确判断出肉含有瘦肉精呢?他指出，很多时候，是要通过对猪肉进行研磨、提取等一系列程序之后，进行检测的，并不是随便捏几下就能把组织液捏出来的，很多时候捏出来的都是水。而且，超市里已被宰杀的猪肉，也会受到周围环境的影响。“消费者不是专业人士，如果盲目地用检测卡筛查自己，可能会没病检出有病来，自己先吓坏了。”他说，这种快速检测卡是部门监管时快速检测的一种工具，而不是由不专业的个人带到超市用的快速检测品。
　　延伸阅读
　　瘦肉精早已禁止生产、使用
　　“ 瘦肉精”学名，英文名clenbuteral，属于β-类激素，是一类人工合成，起初主要用于防治人、畜和痉挛。但因副作用太大，后来被禁用。上世纪80 年代初，美国一家公司意外发现，将一定量的克仑特罗添加到饲料中，可以显著促进动物生长，提高瘦肉率。但如果此药残留于猪体内，人食用后会出现、、手脚、，甚至以致死亡。1997 年以来，我国相关部门多次发文，禁止生产和使用“瘦肉精”。
瘦肉精事件最新报道：
（责任编辑：陈韶鹏）
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