98DNA条形码技术在毒品原植物大麻鉴定中的应用
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98DNA条形码技术在毒品原植物大麻鉴定中的应用
（）：：／／广西植物Ｇｏｕｒｎａｌ．ｘｚｗ．ｘｉ；：／ＤＯＩ１０．３９６９３１４２．２０１４．０４；］，（）：宋炳轲，杨雪莹，倪萍娅，等．ＤＮＡ条形；，，，［］，，（）：ＢＫＹａｎＸＹＮｉＰＹｅｔａ；ＤＮＡ条形码技术在毒品原植物大麻鉴定中的应用；宋炳轲１，杨雪莹２，倪萍娅３，裴黎２＊，张颖２，；（１．中国人民公安大学，北京１０００３８；２．公；摘要：准确鉴定
（）：：／／广西植物Ｇｏｕｒｎａｌ．ｘｚｗ．ｘｉｂ．ｃｎｕｉｈａｉａＪｕｌ．２０１４，３４４５５２－５５６　　　　　　　　　　ｈｔｔ　ｊｇｇｐ：／ＤＯＩ１０．３９６９３１４２．２０１４．０４．０２４．ｉｓｓｎ．１０００－ｊ］，（）：宋炳轲，杨雪莹，倪萍娅，等．ＤＮＡ条形码技术在毒品原植物大麻鉴定中的应用［Ｊ．广西植物，２０１４３４４５５２－５５６，，，［］，，（）：ＢＫＹａｎＸＹＮｉＰＹｅｔａｌ．ＡｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＤＮＡｂａｒｃｏｄｉｎｉｎｃａｎｎａｂｉｃｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎＪ．Ｇｕｉｈａｉａ２０１４３４４５５２－５５６Ｓｏｎ　　　　　　　ｇｐｐｇｇ　　　　ＤＮＡ条形码技术在毒品原植物大麻鉴定中的应用宋炳轲１，杨雪莹２，倪萍娅３，裴　黎２＊，张　颖２，徐小玉２（１．中国人民公安大学，北京１０００３８；２．公安部物证鉴定中心，北京１０００３８；３．杭州市公安局上城区分局，杭州３１１２００）摘　要：准确鉴定毒品原植物大麻的种属及品种具有重要的理论和实践意义。为了探讨ＤＮＡ条形码技术用该研究以６分别采自内蒙、黑龙江、陕西延于毒品原植物大麻种属鉴定及品种鉴定的可行性，０份大麻原植物（陕西榆林４个地区的栽培大麻雌雄各６株及新疆玛纳斯地区的野生大麻雌雄各６株）为材料，通过从其叶安、片中提取的Ｄ利用核糖体ＤＮＡ为模版，ＮＡ基因间隔区的通用引物ＩＴＳ２和叶绿体ＤＮＡ的通用引物ｐｓｂＡ－对扩增片段进行双向测序，将测序结果进行人工矫正和比对。结果显示：所有大麻样本ｔｒｎＨ进行ＰＣＲ扩增，的Ｉ但ｐ用ＴＳ２扩增片段序列没有变异完全一致，ｓｂＡｔｒｎＨ扩增片段变异较大共检测出８种ｃＤＮＡ单倍型，－ｐ并构建Ｎ因此ＭＥＧＥ５．１软件计算种间遗传距离，Ｊ系统聚类树可以有效把这五个地区的大麻样本区别开来，证明Ｄ但其用于大麻的种属鉴定的准确性、可ＮＡ条形码技术在毒品原植物大麻的种属鉴定方面具有可行性，靠性及在其来源地鉴定及品种鉴定中的可能性还有待进一步深入地研究。关键词：ＤＮＡ条形码；大麻；种属鉴定（）中图分类号：７９５Ａ　　文章编号：１０００３１４２２０１４０４０５５２０５　　文献标识码：－－－ＡｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＤＮＡｂａｒｃｏｄｉｎｉｎｃａｎｎａｂｉｃｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　　　　　ｐｐｇ１２３，，ＳＯＮＧＢｉｎｅＹＡＮＧＸｕｅｉｎＮＩＰｉｎａ　－Ｋ　－Ｙ　－Ｙｇｇ，ｇ２２２＊，ＰＥＩＬｉＺＨＡＮＧＹｉｎＸＵ　Ｘｉａｏｕ　　　－Ｙｇ，（，；１．ＣｈｉｎｅｓｅＰｅｏｌｅ’ｓＰｕｂｌｉｃＳｅｃｕｒｉｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔＢｅｉｉｎ１０００３８Ｃｈｉｎａ２．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏＦｏｒｅｎｓｉｃＳｃｉｅｎｃｅ，ＭｉｎｉｓｔｒｏＰｕｂｌｉｃ　　　　　ｊｇｐｙ　ｙ，ｆ　ｙｆ　　　，；，ＳｅｃｕｒｉｔＢｅｉｉｎ１０００３８Ｃｈｉｎａ３．ＳｈａｎＣｈｅｎＤｉｓｔｒｉｃｔＢｒａｎｃｈｏＨａｎｚｈｏｕ　ＰｕｂｌｉｃＳｅｃｕｒｉｔＢｕｒｅａｕ，Ｈａｎｚｈｏｕ３１１２００Ｃｈｉｎａ）　　　　ｊｇｇｙ，ｇｇ　ｆ　ｇｙ　　：，ＡｂｓｔｒａｃｔＴｏｓｔｕｄｔｈｅｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｏｆＤＮＡｂａｒｃｏｄｉｎｏｎｃａｎｎａｂｉｃｓｅｃｉｅｓｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎＤＮＡ　ｗｅｒｅｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍｓｉｘｔ　　　　　　　　　　ｙｙｇｐｙ　　　’（，，’，ｃａｎｎａｂｉｓｌａｎｔｓｌｅａｖｅｓｃｕｌｔｉｖａｔｅｄｃａｎｎａｂｉｓｆｒｏｍＩｎｎｅｒＭｏｎｏｌｉａＨｅｉｌｏｎｉａｎＳｈａｎｘｉＹａｎａｎａｎｄＹｕｌｉｎｗｉｌｄｃａｎｎａ　　　　　　　　　－ｐｇｇｊｇ，），ｂｉｓｆｒｏｍ　ＸｉｎｉａｎＭａｎａｓｓｉｘｍａｌｅａｎｄｆｅｍａｌｅｃａｎｎａｂｉｓｆｒｏｍｅａｃｈｒｅｉｏｎｕｓｅｄｒｉｂｏｓｏｍａｌＤＮＡｉｎｔｅｒｅｎｉｃｒｅｉｏｎ　　　　　　　　　　　　ｊｇｇｇｇ　，，ＩＴＳ２ｕｎｉｖｅｒｓａｌａｎｄｃＤＮＡｔｒｎＨｆｏｒＰＣＲａｍｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｔｈｅｎｓｅｕｅｎｃｅｄｉｎｂｏｔｈｄｉｒｅｃｔｉｏｎｓｔｈｅｒｉｍｅｒｓｓｂＡｒｉｍｅｒ　　　　－　　　　　　　　ｐｐｑｐｐｐ’ｒｅｓｕｌｔｓｃｏｍａｒｅｄｔｏｍａｎｕａｌｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎａｎｄｆｉｎａｌｌｆｏｒＢｌａｓｔｃｏｍａｒｉｓｏｎ．ＩＴＳ２ａｍｌｉｆｉｅｄｓｅｕｅｎｃｅｓｏｆａｌｌｓａｍｌｅｓｗｅｒｅ　　　　　　　　　　　　　ｐｙｐｐｑｐ　，，ｃｏｍｌｅｔｅｌｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔｂｕｔｓｂＡｔｒｎＨ’ａｍｌｉｆｉｅｄｓｅｕｅｎｃｅｓｖａｒｉｅｄｒｅａｔｌｗｈｉｃｈｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｅｉｈｔｋｉｎｄｓｏｆｃＤＮＡ　－　　　　　　　　　ｐｙｐｐｑｇｙｇｐ　，ｈａｌｏｔｅｓ．ＭＥＧＥ５．１ｓｏｆｔｗａｒｅｗａｓｕｓｅｄｔｏｃａｌｃｕｌａｔｅｔｈｅｅｎｅｔｉｃｄｉｓｔａｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎｓｅｃｉｅｓａｎｄｂｕｉｌｄＮＪｈｌｏｅｎｅｔ　　　　　　　　　　　　　－ｐｙｐｇｐｐｙｇｉｃｔｒｅｅｓｗｈｉｃｈｃｏｕｌｄｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｓｅａｒａｔｅｔｈｅｆｉｖｅｒｅｉｏｎｓｏｆｃａｎｎａｂｉｃｓａｍｌｅｓ．ＳｏＤＮＡｂａｒｃｏｄｉｎｏｎｃａｎｎａｂｉｃｓｅｃｉｅｓ　　　　　　　　　　　　　　ｙｐｇｐｇｐ　　，，ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｗａｓｒｏｖｅｄｔｏｈａｖｅｖｉａｂｉｌｉｔｂｕｔｔｈｅａｃｃｕｒａｃｒｅｌｉａｂｉｌｉｔａｎｄｏｓｓｉｂｉｌｉｔｉｅｓｏｆｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｉｔｓｏｒｉｉｎ　　　　　　　　　　　　　ｐｙｙｙｐｇ　ａｎｄｓｅｃｉｅｓｎｅｅｄｆｕｒｔｈｅｒｒｅｓｅａｒｃｈ．　　　　ｐ：；；ＫｅｗｏｒｄｓＤＮＡｂａｒｃｏｄｉｎｃａｎｎａｂｉｓｓｅｃｉｅｓｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　　ｇｐｙ　收稿日期：２０１４０１１９２０１４０３０８－－　　修回日期：－－）基金项目：公安部物证鉴定中心基本科研业务费专项（２０１０ＪＢ００２＊，（）作者简介：宋炳轲（女，河南禹州市人，硕士研究生，主要从事法医遗传学的研究，１９８７Ｅ－ｍａｉｌｓｂｋ１９８７＠１２６．ｃｏｍ。－）：，，，，（）。通讯作者裴黎主任法医师硕士生导师主要从事分子生物学与法医遗传学研究Ｅ－ｍａｉｌｐｅｉｌｉ１２８＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ４期　　　　　　　　宋炳轲等：ＤＮＡ条形码技术在毒品原植物大麻鉴定中的应用为被子植物门双子叶植Ｃａｎｎａｂｉｓｓａｔｉｖａ）　　大麻（　物纲荨麻目大麻科大麻属１～２年生雌雄异株的草本植物。大麻属植物包括栽培大麻、印度大麻和野生大麻三个主要品种及在长期生物进化过程中产生。大麻植物所卢延旭等，的大麻变种和亚种（２００７）含的四氢大麻酚（具有致幻作用，所以大麻被ＴＨＣ）列为与海洛因、可卡因并列的三大毒品之一（谢幸媚）。不同品种大麻中ＴＨＣ的含量有很大的等，２０００差别且大麻是许多国家的重要经济作物，包括我国在内的许多国家根据大麻体内ＴＨＣ含量的高低，将大麻分为工业大麻、毒品大麻和中间型大麻，其中在高额利润后两种被列为严厉打击的对象。然而，的驱使下，全球范围的大麻种植和非法交易活动屡禁不止。与此同时，在大麻犯罪案件中缴获成批未加工的大麻植物（如整株植物、种子等）的情况也屡见不鲜，在法庭科学中，虽然可用传统的形态学方法对大麻进行鉴定，用理化方法如常规化学法、毛细管电泳法、薄层色谱法等对大麻毒性成分进行测定，但对检材的要求较高且这些方法都有很大的局限性，很难或根本无法区分大麻的品种及来源。为了有效法庭科学急需寻找快速准确对打击大麻毒品犯罪，大麻进行种属鉴定和品种鉴定的新方法。这一概念由加ＤＮＡ条形码（ＤＮＡｂａｒｃｏｄｉｎ　ｇ）拿大分类学家Ｐ随ａｕｌＨｅｂｅｒｔ于２００３年首次提出，　后在世界范围内受到了广泛关注，成为生物学研究新热点。它是通过对一个或多个标准目的基因片段是分类学中辅助进行序列分析达到物种鉴定目的，物种鉴定的新技术。目前该技术已成为生物分类学在医药、生态、环境、食品等领研究中的一个新方向，，，域有广泛应用（Ｎａｃｉｒｉｅｔａｌ．２０１２；Ｋｒｅｓｓｅｔａｌ．　　　　）。植物Ｄ２０１２ＮＡ条形码筛选区域主要集中在叶主要包括ｒ绿体和核糖体内转录间隔区，ｏＢ，ｐ，ｒｏＣｌｍａｔＫ，ｒｂｃＬ，ＵＰ，ｔｒｎＨａｔＦａｔＨ，ｓｂＡ，ｓ－ｐ－－ｐｐｐｐ，ｂＫＴＳ等（Ｋｒｅｓｓｅｔａｌ．２０１２；ＬｉｅｔｓｂＩ及核基因Ｉ－ｐ　　　）。但目前尚未有获得广泛任保青等，ａｌ．２０１１；２０１０认同的植物ＤＮＡ条形码。２００９年在墨西哥召开的与会者达成第三届ＤＮＡ条形码国际学术大会上，共识一致建议选择进化速率较快的ＩＴＳ和ｔｒｎＨ－探讨它们在陆地植物中的通用性、分辨率和ｓｂＡ，ｐ适合程度。组成ＩＴＳ即核糖体ＤＮＡ基因间隔区，、该片段的不同部分（序列变异ＩＴＳｌＩＴＳ２和５．８Ｓ）差别较大，但研究ＩＴＳ１片段生物识别率高于ＩＴＳ２，发现Ｉ而且植物叶ＴＳ２片段扩增成功率高于ＩＴＳ１，１．３ＰＣＲ扩增与琼脂糖凝胶电泳样本采集地Ｓａｍｌｅｃｏｌｌｅｃｔｉｎｚｏｎｅ　ｐｇ　新疆玛纳斯ＭａｎａｓｉＸｉｎｉａｎ　ｊｇ　内蒙古ＩｎｎｅｒＭｏｎｏｌｉａ　　ｇ黑龙江Ｈｅｉｌｏｎｉａｎｇｊｇ　’陕西延安Ｙａｎａｎ　陕西榆林ＳｈａｎｘｉＹｕｌｉｎ　　５５３，绿体ＤＮＡ属单系遗传（Ｃｈｅｎｅｔａｌ．２０１０；Ｙａｏｅｔ　　　，，。通过全面综合考２０１０；Ｓｃｈｏｃｈｅｔａｌ．２０１２）ａｌ．　　虑，我们最终选择ＩｓｂＡＴＳ２和ｐｔｒｎＨ作为初步研－究我国不同地区大麻变异情况的对象，对ＤＮＡ条形码技术在毒品原植物大麻鉴定中的应用可行性进行了初步研究，以期为今后进一步的工作奠定基础。１　材料与方法１．１材料采自内蒙古、黑龙江、新疆玛纳斯和陕西延安、陕西榆林五个地区的大麻样本６每个地区雌雄０份，均由公安部物证鉴定中心提供。各六份，１．２大麻全基因组ＤＮＡ的提取与定量，取干叶１利用植物Ｄ０ｍＮＡ提取试剂盒ｇ（，）提取大麻全基因组ＴｉａｎｅｎＢｉｏｔｅｃｈＣｏ．Ｃｈｉｎａ　　ｇ用ＮＤＮＡ，ａｎｏＤｒｏＮＤ２０００Ｓｅｃｔｒｏｈｏｔｏｍｅｔｅｒ－ｐ＿ｐｐ（，，核酸ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＷｉｌｍｉｎｔｏｎＤＥ）　　ｇ定量仪进行定量，定量结果见表１。表１　大麻全基因组ＤＮＡ定量结果Ｔａｂｌｅ１　Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｒｅｓｕｌｔｓ　　／ＯＤ２６０２８０２．０１　１．９８　１．７５　１．８１　１．８７　／平均浓度（ｎＬ）ｇμＭｅａｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　８５．４１１０．２９３．６１００．１１１２．２采用核糖体ＤＮＡ基因间隔区的通用引物朱英杰等，和叶绿体ＤＩＴＳ２（２０１０）ＮＡ的通用引物）刘莹等，进行扩增（引物序列见表ｓｂＡｔｒｎＨ（２０１３－ｐ，由上海英潍捷基公司合成）扩增反应在ｅ２，ｅｎ－ｐｐ内含ｄｏｒｆ扩增仪上进行，ＰＣＲ反应总体系为５０μＬ，／正反向引物（２×ＰＣＲ　Ｍａｓｔｅｒｍｉｘ２５μＬ，１０ｍｍｏｌ　　各１μ去离子水２模版ＤＬ）Ｌ，３μＬ，ＮＡ１μＬ。ＰＣＲ　，反应程序为９４℃预变性５ｍｉｎ；９４℃变性３０ｓ５８，，共３℃退火３０ｓ７２℃延伸４５ｓ０个循环；７２℃终。Ｐ延伸２０ｍｉｎＣＲ产物用２％琼脂糖进行凝胶电泳检测。１．４扩增产物测序对扩增产物进行双向测序，测序反应由上海生物工程公司完成。５５４表２　ＩＴＳ２及ｐｓｂＡｔｒｎＨ通用引物序列－Ｔａｂｌｅ２　Ｔｈｅｓｅｕｅｎｃｅｓｏｆｕｎｉｖｅｒｓａｌ　　　　ｑｒｉｍｅｒＩＴＳ２ａｎｄｓｂＡｔｒｎＨ　　－ｐｐ引物编号ＰｒｉｍｅｒＮｏ．　ＩＴＳ２Ｓ２Ｆ（正向引物）广　西　植　物　　　　　　　　　　　　　　　　　３４卷的２．由于ｃ７２％，ＤＮＡ常被看作是一个独立的遗ｐ，传单位，在细胞分裂时不经受重组（Ｓｃｈａａｌｅｔａｌ．　　）。故对来自五个地区来源的６１９９８０份大麻样本可），表３其中新疆玛纳斯地定义８种ｃＤＮＡ单倍型（ｐ黑龙区的１２份雌雄标本序列完全一致为ＨＡ型，江地区的六份雌性标本序列完全一致均为ＨＡ型、雄性均为ＨＢ型，内蒙地区的雌性序列完全一致均雄性均为ＨＤ型，陕西延安地区的雌性序为ＨＣ型、列完全一致为ＨＥ型、雄性为ＨＦ型，陕西榆林地区的六份雌性标本序列完全一致为ＨＧ型、雄性为）。图１ＨＨ型。分析结果（表３　大麻的变异位点与单倍型Ｔａｂｌｅ３ａｒｉａｔｉｏｎａｎｄｈａｌｏｔｅｏｆｃａｎｎａｂｉｓｓａｔｉｖａｏｓｉｔｉｏｎ　　Ｖ　　　　　　ｐｙｐｐ引物序列长度ＬｅｎｔｈｏｆＰｒｉｍｅｒ　　ｇｓｅｕｅｎｃｅｓｑ１ｂｐ　１２ｂｐ　４０ｂｐ　４７ｂｐ　２０２ｂｐ　２８４ｂｐ　３３０ｂｐ　３７７ｂｐ　３８１ｂｐ　３９１ｂｐ　４０４ｂｐＨＡＨＢＨＣＨＤＨＥＨＦＨＧＨＨ引物序列Ｐｒｉｍｅｒｓｅｕｅｎｃｅｓ　ｑＡＴＧＣＧＡＴＡＣＴＴＧＧＴＧＴＧＡＡＴＳ３ＲＧＡＣＧＣＴＴＣＴＣＣＡＧＡＣＴＡＣＡＡＴ（反向引物）ｔｒｎＨｓｂＡ－　ｆｐｗｄＰＡＧＴＴＡＴＧＣＡＴＧＡＡＣＧＴＡＡＴＧＣＴＡ（正向引物）ＲｅｖＴＨＣＧＣＧＣＡＡＴＧＧＴＧＧＡＴＴＣＡＣＡＡＴＣＣ（反向引物）１．５测序结果的拼接与分析用ＤＮＡＭＡＮｖｅｒｓｉｏｎ６软件及ＣｈｒｏｍａｓＬＩＴＥ　　　用ＭＥｖｅｒｓｉｏｎ２．０１软件完成序列拼接，ＧＡ５．１软　　件进行６０份大麻样本的序列比对并进行变异位点／／／然后登陆ｈ分析，ｔｔｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｏｖｐ：ｇ将所得序列进行ｂ并利用Ｂｌａｓｔ．ｃｉ网站，ｌａｓｔ比对，ｇ基于ＫＭＥＧＡ５．１进行多重比对，ｉｍｕｒａ２ａｒａｍｅ　－－ｐ－（双参数模型计算遗传距离，并用邻接法ｔｅｒＫ２Ｐ）（），构建系统聚类树（同时ｎｅｉｈｂｏｕｒＮＪ树）ｏｉｎｉｎ－ｇｊｇ（以ｂ自展支持率１重复检验各分ｏｏｔｓｔｒａ０００次）　ｐ支的支持率。Ｃ　Ｃ　Ｃ　Ｃ　Ｔ　Ｃ　Ｃ　Ｔ　Ｃ　Ｔ　Ａ　Ｔ　Ｇ　Ｇ　Ｇ　Ｔ　Ａ　Ｔ　Ａ　Ａ　Ｃ　Ｃ　Ｃ　Ｃ　Ａ　Ｃ　Ａ　Ｃ　Ｃ　Ｃ　Ｃ　Ｃ　Ｃ　Ｔ　Ｔ　Ｔ　Ｇ　Ａ　Ｇ　Ｔ　Ａ　Ｔ　Ｃ　Ｃ　Ａ　Ｇ　Ｃ　Ｃ　Ｃ　ＣＣ　ＴＣ　ＣＴ　ＴＧ　ＧＴ　ＴＡ　ＡＣ　Ｃ２　结果与分析２．１扩增结果实验结果表明ＩＴＳ２和ｐｔｒｎＨ对６０份大ｓｂＡ－麻样本的扩增及测序成功率均为１００％。２．２测序及序列比对通过测序得引物ＩＴＳ２和ｐｔｒｎＨ的完整扩ｓｂＡ－增片段Ｄ使用ＮＮＡ序列，ＣＢＩ数据库中的Ｂｌａｓｔ工比对后可以确定与该段序列相似度最具进行搜索，高的匹配均为大麻核糖体和叶绿体基因，匹配度分别达到１序列号分别为Ｋ００％和９９％，Ｃ２９２６２９．１和ＫＣ５７８８２０．１。说明扩增序列即为所需要的大麻核糖体和叶绿体基因的一部分。２．３序列变异比较应用ＭＥ发现采自５个ＧＥ５．１进行序列对比，不同地区的６０份大麻样本的ＩＴＳ２引物扩增区域且所有大麻样本测序所得的序列长度均为４４６ｂｐ，的序列完全一致，不含Ｐ未发现变异位点；ｏｌｙ结构，引物ｐ共ｓｂＡｔｒｎＨ扩增片段的实际长度为４０４ｂ－ｐ，发现１分别为１、１个单一多态性变异位点（１２、４０、），占总分析位点４７、２０２、２８４、３３０、３７７、３８１、３９１、４０４Ｔ　Ｔ　Ｔ　Ｇ　Ｔ　Ｔ　Ｔ　ＴＴ　Ｇ　Ｇ　Ｇ　Ｔ　Ｔ　Ｔ　ＴＧ　Ｇ　Ｇ　Ｇ　Ｇ　Ｔ　Ｔ　Ｇ图１　ｐｔｒｎＨ序列的变异位点ｓｂＡ－（“”表示与黑龙江雌性碱基相同）．Ｆｉ．１ａｒｉａｔｉｏｎｏｆｔｒｎＨｓｅｕｅｎｃｅｏｓｉｔｉｏｎｓｂＡ　Ｖ　　　－　ｇｑｐｐ２．４遗传距离分析将五个地区的大麻序列进行分析，根据碱基变异位点的情况，用Ｋｉｍｕｒａ２Ｐａｒａｍｅｔｅｒ距离模式计－－。算的遗传距离（表４）五个地区的大麻样本遗传距４期　　　　　　　　宋炳轲等：ＤＮＡ条形码技术在毒品原植物大麻鉴定中的应用表４　五个地区大麻遗传距离分析Ｔａｂｌｅ４　ＧｅｎｅｔｉｃｄｉｓｔａｎｃｅａｎａｌｓｉｓｏｆＣａｎｎａｂｉｃｉｎｆｉｖｅｒｅｉｏｎｓ　　　　　　　　ｙｇ黑龙江雌性黑龙江雄性内蒙雄性内蒙雌性新疆雌性ＨｅｉｌｏｎｉａｎｅｉｌｏｎｉａｎｎｎｅｒＭｏｎｏｌｉａＩｎｎｅｒＭｏｎｏｌｉａＸｉｎｉａｎ　　ｇｊｇＨｇｊｇＩｇｇｊｇｆｅｍａｌｅｍａｌｅｍａｌｅｆｅｍａｌｅｆｅｍａｌｅ黑龙江雌性Ｈｅｉｌｏｎｉａｎｆｅｍａｌｅｇｊｇ　内蒙雌性ＩｎｎｅｒＭｏｎｏｌｉａｆｅｍａｌｅ　　ｇ内蒙雄性ＩｎｎｅｒＭｏｎｏｌｉａｍａｌｅ　　ｇ新疆雌性Ｘｉｎｉａｎｆｅｍａｌｅｊｇ　新疆雄性Ｘｉｎｉａｎｍａｌｅｊｇ　延安雌性’Ｙａｎａｎｆｅｍａｌｅ　延安雄性’Ｙａｎａｎｍａｌｅ　榆林雌性Ｙｕｌｉｎｆｅｍａｌｅ　榆林雄性Ｙｕｌｉｎｍａｌｅ　０．０１２５０．００５　０．０１２５　０　０　０．００５　０．００５　０．００２５　０．００２５　０．０１２５０．０２０１　０．０１２５　０．０１２５　０．０１２５　０．０１７５　０．０１５　０．０１　０．００７５０．００５　０．００５　０．０１　０．０１　０．００７５　０．００７５　０．０１２５０．０１２５　０．０１７５　０．０１２５　０．０１５　０．０１５　００．００５　０．００５　０．００５０．００５　０．０１新疆雄性Ｘｉｎｉａｎｊｇｍａｌｅ延安雌性’Ｙａｎａｎｆｅｍａｌｅ延安雄性’Ｙａｎａｎｍａｌｅ５５５榆林雌性Ｙｕｌｉｎｆｅｍａｌｅ０．００２５００２５００７５００２５　０．　０．　０．０．００２５００２５００７５００７５　０．　０．　０．　０．００５离在０．平均遗传距离为０．０００～０．０２０１，００８。其中黑龙江的雄性大麻与内蒙的雄性大麻最大，为０．新疆的雄性雌性和黑龙江的雌性最小。０２０１，２．５系统发育邻接树分析从图２可以看出，新疆的野生雌雄大麻与黑龙江的雌性大麻聚为一支，陕西延安和榆林及黑龙江地区的雄性大麻聚为一支，内蒙的雌性与雄性大麻聚为一支，陕西延安和榆林的雌性大麻聚为一支。说明ｓｂＡｔｒｎＨ条形码序列可用于不同地域大麻雌－雄间的鉴别分析。３　讨论大麻是一种集造纸、纺织、食用、药用等作用于具有抑制杂草生长、适一身的经济价值很高的作物，应环境能力强等特点，有利于戈壁滩涂和贫瘠土地的绿化与开发利用。本实验结果表明，五个地区的大麻样本的ＩＴＳ２引物扩增区域测序所得的序列完全一致，说明利用核糖体通用引物ＩＴＳ２不能对不虽然如此，但通过同地域来源的大麻种属进行鉴定，而采用ｐｂｌａｓｔ比对却可以把大麻鉴定出来；ｓｂＡ－其不但可ｔｒｎＨ条形码序列对大麻研究的结果表明，以把不同地域来源的大麻鉴定出来还可以把大麻的雌性与雄性、野生大麻与栽培大麻分辨出来。实验不同地区的雌雄大麻的ｃ结果还表明，ＤＮＡ单配ｐ而且由于大麻通常是雌雄异株，雄性植株的体不同，纤维质量高于雌性植株，而雌性植株的有毒成分高雄株比雌株先成熟，对机械化的收割造于雄性植株，成不便；雌雄株在幼苗时期较难分辨，只有当其生殖器官原基开始发育时才能正确识别（李仕金等，）。基于此，本研究一方面可以为大麻犯罪案件２００８中查找毒品来源、铲除毒品种植基地提供线索，有利另一方面也于打击个人及集团式的大麻贸易活动；为大麻育种提供了可能，而且有助于培育出低毒、高纤维利用价值的雌雄同株的大麻新品种，以造福人类和社会。图２　基于ｐｔｒｎＨ条形码序列构建的五个ｓｂＡ－地区雌雄大麻间的ＮＪ系统进化树Ｆｉ．２Ｊｔｒｅｅｏｆｆｉｖｅｒｅｉｏｎｓｂｅｔｗｅｅｎｍａｌｅａｎｄｈｌｏｅｎｅｔｉｃ　Ｎ　　　　　　　　ｇｇｐｙｇｆｅｍａｌｅｃａｎｎａｂｉｓｂａｓｅｄｏｎｓｂＡｔｒｎＨｂａｒｃｏｄｅｓｅｕｅｎｃｅｓ　　　　－　　ｐｑ５５６广　西　植　物　　　　　　　　　　　　　　　　　３４卷，，，卢延旭）董鹏）崔晓光）ＬｕＹＸ（ＤｏｎＰ（ＣｕｉＸＧ（ｅｔａｌ．２００７．　　　ｇ　ｂｅｔｗｅｅｎｉｎｄｕｓｔｒｉａｌｈｅｍａｎｄｍａｒｉｕａｎａｈｅｍａｎｄｉｎＤｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　　　　　　－ｐｊｐ　　（ｄｕｓｔｒｉａｌｈｅｍｃｓｕｓｅｖａｌｕｅ工业大麻与毒品大麻的区别及其可　　　ｐ）［］，利用价值Ｊ．中国药理学通报）Ｃｈｉｎ　ＰｈａｒｍａｃｏｌＢｕｌｌ（２３　（）：８１１１２－１１１４　　，，刘莹）张安世）赵利新）ＬｉｕＹ（ＺｈａｎＡＳ（ＺｈａｏＬＸ（．２０１３．　　ｇ　Ｔｈｅｈｌｏｅｎｅｔｉｃｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｏｆｓｏｍｅｂｒｏｈｔｅｓｂａｓｅｄｏｎ　　　　　　ｐｙｇｐｙｐｙ　（基于ｔｔｒｎＨ－ＰｓｂＡｒｎＨ－ＰｓｂＡ序列的部分苔藓植物亲ｅｎｅ　ｇ［］，湖北农业科学）缘关系分析）Ｊ．ＨｕｂｅｉＡｒｉｃＳｃｉ（５２　　ｇ（）：２０５０５７－５０５９　　，，ＹＣａｅｔａｎｏＳＳａｌａｍｉｎＮ．２０１２．ＰｌａｎｔＤＮＡｂａｒｃｏｄｅｓａｎｄＮａｃｉｒｉ　　　　　　［］，（）：ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｆｌｏｗＪ．ＭｏｌＥｃｏｌＲｅｓｏｕｒ１２４５７５－ｔｈｅｅｎｅ　　　　　　ｇ５８０，任保青）陈之端）ＲｅｎＢＱ（ＣｈｅｎＺＤ（．２０１０．ＤＮＡｂａｒｃｏｄｉｎ　　　ｇ（［］植物Ｄ植物学ｌａｎｔｌｉｆｅＮＡ条形码技术）Ｊ．Ｃｈｉｎ　ＢｕｌｌＢｏｔ（　　ｐ，（）：报）４５１１－１２，ＳｃｈｏｃｈＣＬ，ＳｅｉｆｅｒｔＫＡ，ＨｕｈｎｄｏｒｆＳｅｔａｌ．２０１２．Ｎｕｃｌｅａｒｒｉｂｏｓｏ　　　　　－（）ｍａｌｉｎｔｅｒｎａｌｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄｓａｃｅｒＩＴＳｒｅｉｏｎａｓａｕｎｉｖｅｒｓａｌＤＮＡ　　　　　　　ｐｇ［］，（）：ｂａｒｃｏｄｅｍａｒｋｅｒｆｏｒＦｕｎｉＪ．ＰＮＡＳ１０９１６６２４１－６２４６　　　　　ｇ，，，ＢＡＨａｗｏｒｔｈＤＡＯｌｓｅｎＫＭｅｔａｌ．１９９８．ＰｈｌｏｅｏＳｃｈａａｌ　　　　－ｙｙｇ：［］，ｓｔｕｄｉｅｓｉｎａｎｄＭｏｌＥｃｏｌｒａｈｉｃｌａｎｔｓｐｒｏｂｌｅｍｓｒｏｓｅｃｔｓＪ．　　　　　　ｇｐｐｐｐ（）：７４４６５－４７４，（，，谢幸媚）吴坤龙）李俊亿）ＸＭ（ＷｕＫＬＬｉＪＹ（ｅｔａｌ．２０００．Ｘｉｅ　　　　ａｌｉｃａｔｉｏｎａｎｄｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆＤＮＡｔｅｓｔｉｎｉｎｃｒｉｍｉｎａｌＴｈｅｌａｎｔ　　　　　　　　ｐｐｇｐ　（植物ＤｉｎｖｅｓｔｉａｔｉｏｎｓＮＡ鉴定在犯罪侦查上之应用与评估）ｇ］，：［刑事科学）Ｊ．ＦｏｒｅｎＳｃｉ（４９１－７　，ＹａｏＨ，ＳｏｎＪＬｉｕＣ，ｅｔａｌ．２０１０．ＵｓｅｏｆＩＴＳ２Ｒｅｉｏｎａｓｔｈｅ　　　　　　　ｇｇ　［］ｕｎｉｖｅｒｓａｌＤＮＡａｒｃｏｄｅｏｒｌａｎｔｓｎｄｎｉｍａｌｓＪ．　　Ｂ　ｆ　ｐ　ａ　ａ，：ＰＬｏＳｏｎｅ５１３１０２　（），（，，陈士林）姚辉）ＺｈｕＹＪ朱英杰ＣｈｅｎＳＬＹａｏＨ（ｅｔａｌ．２０１０．　　　　重楼属ｂａｒｃｏｄｉｎｔｈｅｍｅｄｉｃｉｎａｌｌａｎｔｓｏｆｔｈｅｅｎｕｓＰａｒｉｓ（ＤＮＡ　　　　　　　ｇｐｇ　［］药用植物Ｄ药学ＮＡ条形码鉴定研究）Ｊ．Ａｃｔａ　Ｐｈａｒｍ　Ｓｉｎ（，（）：学报）４５３３７６－３８２４　结论本实验是在有限的大麻标本中得出的结论，故为了更好更精确地验证ＤＮＡ条形码技术对毒品原植物大麻的鉴定还需要一方面加大同一地区大麻雌雄植株的采样，另一方面加大更多地区大麻品种的另外也需要进一步深入筛选更多更合适的条研究；形码序列。总的来说，ＤＮＡ条形码技术有望成为将来毒品案件刑事侦查和检验鉴定的新方法。致谢　本论文由公安部物证鉴定中心基本科研资助，并得到了公安部业务经费项目（２０１０ＪＢ００２）物证鉴定中心法医物证检验处的各位老师的指导和帮助，在此深表感谢！参考文献：ＣｈｅｎＳＬ，ＹａｏＨ，ＨａｎＪＰ，ｅｔａｌ．２０１０．ＶａｌｉｄａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＩＴＳ２ｒｅ　　　　　　　－ｉｏｎａｓａｎｏｖｅｌＤＮＡｂａｒｃｏｄｅｆｏｒｉｄｅｎｔｉｆｉｎｍｅｄｉｃｉｎａｌｌａｎｔｓｅ　　　　　　　　　－ｇｙｇｐｐ　［］，（）：ｃｉｅｓＪ．ＰＬｏＳｏｎｅ５１８６１３　　，：ＭＫｒｅｓｓＷＪＥｒｉｃｋｓＤＬ．２０１２．ＤＮＡＢａｒｃｏｄｅｓｅｔｈｏｄｓａｎｄＰｒｏｔｏ　　　　　－［：，：ｃｏｌｓＭ］．ＢｅｒｌｉｎＳｒｉｎｅｒ８５８３－８ｐｇ，ＬｉＤＺＬｉｕＪＱ，ＣｈｅｎＺＤ，ｅｔａｌ．２０１１．ＰｌａｎｔＤＮＡｂａｒｃｏｄｉｎｉｎ　　　　　　ｇ　［］（）：Ｊ．Ｊ　Ｓｓｔ＆Ｅｖｏｌ，４９３１６５－１６８Ｃｈｉｎａ　ｙ（，，（，李仕金）辛培尧）周军）ＬｉＳＪＸｉｎＰＹ（ＺｈｏｕＪｅｔａｌ．２００８．　　　　ＰｒｏｒｅｓｓｅｓｏｎｒｓｅａｒｃｈｏｆｓｅｘｕａｌｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆＣａｎｎａｂｉｓｓａｔｉ　　　　　　　　－ｇ（）［］（大麻性别研究进展中国麻ｖａＬ．Ｊ．ＰｌａｎｔＦｉｂｅｒＳｃｉＣｈｉｎ　　　　，（）：业学）３０２１１０－１１３（上接第５ａｅ６９页Ｃｏｎｔｉｎｕｅｆｒｏｍ５６９）　　　ｐｇ（［］狗枣猕猴桃果实发育的解剖学观察）ａｘｉｍ．Ｊ．Ｃｈｉｎ　Ｂｕｌｌ　Ｍ（），（）：植物学通报Ｂｏｔ１９４４６９－４７６（），（），，陈亚萍章英才景红霞）ＣｈｅｎＹＰＺｈａｎＹＣＪｉｎＨＸ（ｅｔａｌ．　　ｇｇ　　２０１３．Ｔｈｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｏｆｈｏｔｏｓｎｔｈｅｓｉｓａｎｄｔｈｅｒｏｗｔｈｏｆ　　　　　　　ｐｙｇ（灵武长枣光ｏｆＺｉｚｉｈｕｓｕｕｂａＭｉｌｌｃｖ．ｌｉｎｗｕｃｈａｎｚａｏｆｒｕｉｔ　　　　　ｐｊｊｇｇ［］合特性及果实生长发育特征）北方园Ｊ．Ｎｏｒｔｈｅｒｎ　Ｈｏｒｔｉｃ（，（）：艺）１９１－４（），，，刘国成马怀宇）吕德国）ＬｉｕＧＣＭａＨＹ（ＬｖＤＧ（ｅｔａｌ．　　　　‘’２０１２．ＲｅｓｅａｒｃｈｏｎｔｈｅｃｈａｎｅｏｆＨａｎｆｕａｌｅｆｒｕｉｔａｎａｔｏｍｉｃ　　　　　　ｇｐｐ（“”寒富苹果贮藏期果实解ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｕａｌｉｔａｎｄｄｕｒｉｎｓｔｏｒａｅ　　ｑｙｇｇ　　［］，北方园艺）剖结构及品质变化研究）Ｊ．Ｎｏｒｔｈｅｒｎ　Ｈｏｒｔｉｃ（（）：１５１－４（ＷａｎＸＬ王勋陵）．１９７４．Ａｒｅｌｉｍｉｎａｒｓｔｕｄｏｆｔｈｅｄｅｖｅｌｏ　　　－ｇｐｙｙｐ　　　（枣果实发育解剖学的初ｍｅｎｔａｌａｎａｔｏｍｏｆＣｈｉｎｅｓｅｕｕｂｅｆｒｕｉｔ　　　　ｙｊｊ　［］（），（）：步观察）植物学报Ｊ．Ａｃｔａ　ＢｏｔＳｉｎ１６２１６１－１６９　（），（），（），颉敏华张永茂李守强ＭＨＺｈａｎＨＭＬｉＳＱｅｔａｌ．Ｘｉｅ　　　ｇ　‘２００８．Ｐｏｓｔｈａｒｅｓｔｆｒｅｓｈｋｅｅｉｎｓｔｏｒａｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｌｉｎ　　－　　－ｐｇｇｇ　（）（ｗｕｃｈａｎｚａｏＺｉｚｉｈｕｓｕｕｂａＭｉｌｌ．灵武长枣采后保鲜贮藏　　ｇｐｊｊ）［］，特性研究Ｊ．Ａ西北植物学报）ｃｔａ　ＢｏｔＢｏｒ－ＯｃｃＳｉｎ（２８　　（）：５１０３１－１０３５　　（），（，，章英才）苏伟东）ＹａｎＪ杨军ＺｈａｎＹＣＳｕ　ＷＤ（ｅｔａｌ．２０１１．　ｇｇ　　ＩｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄａｓｓａｉｎｏｆｏｌｓａｃｃｈａｒｉｄｅｉｎＺｉｚｉｈｕｓｕｕｂａＭｉｌｌ　　　　　　　ｙｇｐｙｐｊｊ　（）［］ｃｖ．ｌｉｎｗｕｃｈａｎｚａｏ灵武长枣多糖含量的测定研究Ｊ．ｇｇ（，（）：Ｎｏｒｔｈｅｒｎ　Ｈｏｒｔｉｃ北方园艺）１４３５－３７（，，杨淑娟）章英才）郑国琦）ＹａｎＳＪＺｈａｎＹＣ（ＺｈｅｎＧＱ（．ｇｇｇ　　　２０１０．Ｃｏｍａｒａｔｉｖｅｓｔｕｄｏｎｄｉｓｓｅｃｔｅｄｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓｏｆｎｏｒｍａｌｆｒｕｉｔ　　　　　　ｐｙ　（灵武长枣正常果与裂ａｎｄｃｒａｃｋｉｎｏｎｅｓｏｆＬｉｎｗｕＬｏｎｕｕｂｅ　　　　－ｇｇｇｊｊ　［］，北方园艺）果解剖结构的比较研究）Ｊ．Ｎｏｒｔｈｅｒｎ　Ｈｏｒｔｉｃ（（）：２２１５－１８（，，杨淑娟）郑国琦）章英才）ＹａｎＳＪＺｈｅｎＧＱ（ＺｈａｎＹＣ（．ｇｇｇ　　　２＋２０１１．ＵｌｔｒａｃｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｏｆＣａｉｎｔｈｅｎｏｒｍａｌｆｒｕｉｔｓ　　　　　　ｙ（灵武长枣正常果及裂ａｎｄｃｒａｃｋｉｎｏｎｅｓｏｆＬｉｎｗｕＬｏｎｕｕｂｅ　　　　－ｇｇｇｊｊ　２＋）［］果中Ｃ的细胞化学定位研究西ａＪ．Ａｃｔａ　ＢｏｔＢｏｒ－ＯｃｃＳｉｎ（　　，（）：北植物学报）３１１００８４－００８８（），（），（喻菊芳魏天军陈卫军）ＪＦＷｅｉＴＪＣｈｅｎ　ＷＪ．２００８．ＴｈｅＹｕ　　ｒｅｓｅａｒｃｈｅｒｍｌａｓｍｏｆｒｅｓｏｕｒｃｅｓａｎｄｔｈｅｓｔｕｄｏｎｖａｒｉｅｔｓｅｌｅｃ　　　　　　　－ｇｐｙｙ　　（灵武长枣种质ｔｉｏｎｏｆＺｉｚｉｈｕｓｕｕｂａＭｉｌｌｃｖ．ｌｉｎｗｕｃｈａｎｚａｏ　　　　　ｐｊｊｇｇ［］（，（）：资源调查和品种选优研究）Ｊ．Ｃｈｉｎ　Ｆｒｕｉｔｓ中国果树）１５６－５７（，，喻菊芳）朱连成）魏天军）ＪＦＺｈｕＬＣ（ＷｅｉＴＪ（．２００４．Ｙｕ　　　（）（（）宁夏灵武长ＮｉｎｘｉａＬｕｕｂｅｉｎｗｕＬｏｎｔｅｘｔｕａｌｒｅｓｅａｒｃｈ－　　ｇｇｇｊｊ）［］枣考证Ｊ．Ｎ宁夏农林科ｉｎｘｉａＪ　ＡｒｉｃＦｏｒＳｃｉＴｅｃｈｎｏｌ（　　　　ｇｇ），（）：技５３１－３２（，，（苏伟东）杨军）ＹＣ章英才）Ｓｕ　ＷＤ（ＹａｎＪ．２０１２．ＴｈｅＺｈａｎｇｇ　　ｓｔｏｒｅｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｏｌｓａｃｃｈａｒｉｄｅｉｎＺｉｚｉｈｕｓｕ－　　　　　　　ｐｙｐｊ（ｕｂａＭｉｌｌｃｖ．ｌｉｎｗｕｃｈａｎｚａｏ灵武长枣多糖积累分布特征研　　ｊｇｇ）［］（，（）：究Ｊ．Ｎｏｒｔｈｅｒｎ　Ｈｏｒｔｉｃ北方园艺）２１７－１１包含各类专业文献、生活休闲娱乐、文学作品欣赏、应用写作文书、幼儿教育、小学教育、专业论文、中学教育、高等教育、98DNA条形码技术在毒品原植物大麻鉴定中的应用等内容。
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　二、问题的提出 根据我国刑法第 3s1 条规定“非法种植罂粟、大麻等毒品原植物的,一律强制铲除。有下列情形之一的,处 五年以下有期徒刑、拘役或者管制,并处罚金:(...
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　然而有一种影响却从为被正视过――毒品原植物消耗大量能源。 生产毒品和 进行非法交易不仅消耗金钱,还消耗能源、水和森林资源。从大麻、可卡因和海洛因,到脱 氧麻黄...
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