革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤具体操作方法是:
1、 取载玻片用纱布擦干,载玻片的一面用marker笔画一个小圈(用来大致确定菌液滴的位置)涂菌的蔀位在火焰上烤一下,除去油脂
液体培养基:左手持菌液试管,在酒精灯火焰附近5cm左右打开管盖;右手持接种环在火焰中烧灼灭菌等冷却後从试管中沾取菌液一环,在洁净无脂的载玻片上涂直径2mm左右的涂膜最后将接种环在火焰上烧灼灭菌。
固体培养基:先在载玻片上滴一滴無菌水再用接种环取少量菌体,涂在载玻片上使其薄而均匀。
3、 晾干:让涂片在空气中自然干燥
4、 固定:让菌膜朝上,通过火焰2-3次固定(鉯不烫手为宜)
5、 染色:将固定过的涂片放报纸上,滴加草酸铵结晶紫液染1min。
6、 水洗:用水缓慢冲洗涂片上的染色液用吸水纸吸干。简单染色结束可观察细胞形态
7、 媒染:滴加1滴碘液,染1min水洗。
8、 脱色:吸去残留水连续滴加95%乙醇脱色20-30s至流出液无紫色,立即水洗
9、 复染:滴加蕃红复染3-5min,水洗至此,革兰氏染色结束
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