实验菌种 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtillis)1．210；D53、D56：从活性污泥中分离得到 培养基的配制 斜面培养基(营养琼脂)：蛋白胨1％，NaC1 0．5 D／0牛肉膏0．3％，琼脂2％液体营养肉汤培养基：蛋白胨1％，NaC1 0．5％牛肉膏0．5％。 淀粉酶试验培养基：在营养琼脂培养基中加2％的鈳溶性淀粉即成 仪器与设备：DYY．III33B型电泳槽，MJResearch．PTC．200PCR仪灭菌锅，离心机37％ 恒温培养箱，水浴锅 取样、富集培养 取样时将水和污泥一起取来，静置使污泥沉降待污泥沉降后直接用灭菌过的移液管吸取1．0mL上清液，注入无菌水中稀释适宜的倍数，以无菌操作注入固体培养基平板中倒置放入生化培养箱中，37％富集培养24h-36h 菌种的鉴定 形态学观察：取少量菌种制成玻片，通过革兰氏染色在显微镜下观察菌落形态特征。生理生化鉴定：根据《常见细菌系统鉴定手册》进行鉴定16SrRNA同源性比较：取菌株D53、D56的48h的平板培养物为模板，配制50 L地体系进行PCR擴增。 PCR反应体系：ddH2O 381~L10×Taq E Bufer 5 PCR产物经脱盐纯化后，由北京华大中生科技发展有限公司进行测序要求双向测通，将拼接后的测序 结果输入、 州．NCBI．nlm．nih．gov利用BLAST软件，将测定得到的基因序列与Genbank数据库的序列作比对分析进行同源性比较。 分离菌株的产淀粉酶透明圈试验 按参考文献[8]方法分别将D53、D56斜面菌株接入养肉汤液体培养基的试管中37％培养24h后，分别划 线接种于淀粉酶试验培养基中作2个平行。通过稀释菌液以使在岼板上出现单菌落将接好的平板置于37~C恒温培养箱中培养24h，取出后分别滴加现配制的路哥氏碘液全部漫过平板，放置片刻即可对其透奣圈进行观察和测量。 菌株产淀粉酶粗酶活的测定 酶活力定义：lmL酶液于60％、pH6．0的条件下在1h内催化2％可溶性淀粉成为糊精的克数为1个酶活 仂单位。 将保存在斜面的菌株分别接入发酵培养基中，37％、200r／min培养44h后分别取发酵液测定酶活。