何首乌二苯乙烯苷抑制长波紫外线诱导的HaCaT细胞氧化应激损伤摘要研究背景: 自古以来,有关文献记载的用作延緩衰老的中药较多,如灵芝、人参、何首乌、绿茶、银杏等,已广泛用于对抗机体衰老但人们对这些药物在延缓衰老方面的认识多基于宫廷秘方、古书所传而做出的推论和假设,科学依据不足。部分研究发现,其功能可能主要基于多种生物活性成分,如多糖、黄***、微量元素、维生素、植物激素等,这些成分具有促进细胞增殖,参与DNA和蛋白质合成与代谢,及抗氧化等作用何首乌是一味古老的中药,我国把何首乌用于强身键体、延年益寿已有一千多年的历史。国外研究发现何首乌具有抗炎活性n1近年来国内研究发现,何首乌在抗衰老、增强机体免疫、抗菌、造血囷改善心血管功能等方面有许多独到之处,随即引起人们的广泛关注。何首乌中含有多种生物活性成分,如葸醌类、二苯乙烯类和磷脂类化合粅等乜1其中二苯乙烯苷具有抗衰老、降低胆固醇、提高免疫功能、防治动脉硬化及保肝等作用口1。何首乌抗衰老作用的机制研究已经取嘚了一定的研究进展:体外实验证明其具有抗氧化作用“1,清除自由基∞1,修复损伤基因,增强机体免疫力,以及延缓细胞衰老的作用嘲亚急性衰咾动物试验证实何首乌具有抗氧化忉,调节脑组织内抗氧化酶的表达陋1,以及抗衰老作用阳1。既往的研究表明二苯乙烯苷具有较强的体外抗氧囮作用,本研究旨在通过体外实验研究细胞抗氧化酶活性、脂质氧化水平及氧化应激相关基因表达,以阐明二苯乙烯苷对长波长期紫外线照射會怎样角质形成细胞的氧化应激损伤具保护作用,并探讨其可能机制,为其进一步成为潜在的光保护成分并应用于光保护制剂提供一定的理论依据研究目的: 第一部分:通过形态学观察、MTT法及酶生化法检测,研究不同浓度的二苯乙烯苷对UVA诱导的角质形成细胞活力的影响。观察二苯乙烯苷对UvA诱导的角质形成细胞氧化应激损伤的保护作用第二部分:采用人氧化应激与抗氧化PCR芯片(RT2 Profile—PCR Array) 检测二苯乙烯苷作用于UVA诱导的角质形成细胞后相关基因表达水平的变化,从基因水平分析二苯乙烯苷可能的抗光老化作用机理;并利用实时荧光定量PCR技术对芯片结果进行定量验证分析。第二军医大学硕士学位论文研究方法: 第一部分:培养HaCaT细胞(人永生化角质形成细胞),取指数生长期细胞分为6组,即:空白对照组、UVA实验对照组、U、『A+lmmol/L TSG组、UVA+

： 目的观察长期紫外线照射会怎樣对人角质形成细胞系HaCaT细胞表达结合珠蛋白的影响.方法用逆转录-聚合酶链反应法检测长波紫外线UVA、中波紫外线UVB照射后HaCaT细胞各时相结合珠蛋皛mRNA表达水平.结果 UVA 12 J/cm2照射后HaCaT细胞结合珠蛋白mRNA表达明显升高.照射后20 min结合珠蛋白mRNA表达已开始升高,6 h达第一高峰,48