【摘要】：目的　研究端粒 (TL M)在卵巢恶性肿瘤中的表达和相互关系　方法　 (1)采用 PCR- EL ISA半定量方法研究端粒酶活性在卵巢恶性肿瘤、癌旁组织、交界性肿瘤、良性肿瘤、正常卵巢及卵巢肿瘤细胞株的表达情况。(2 )采用 RT- PCR方法检测人端粒酶逆转录酶 (h tert基因)基因 m

【摘要】：端粒位于真核细胞染銫体末端,由串联排列的DNA重复序列和端粒结合蛋白构成,其作用为保护染色体末端并维护基因组稳定端粒随细胞分裂次数的增加而不断缩短,當缩短到临界长度时就会导致细胞衰老、死亡。端粒酶是一种特殊的核糖核蛋白复合体,能以其自身RNA(TR)为模板反转录合成端粒重复序列,并将其加到染色体末端,从而恢复端粒功能,使细胞获得无限增殖能力约90%以上的恶性肿瘤细胞都含有端粒酶活性,而仅有睾丸、卵巢组织及造血细胞系等少数正常组织细胞可检测到端粒酶活性。端粒酶催化亚基tert基因是端粒酶活性的限制组分,在原发性肿瘤、癌细胞系和永生化细胞系中,tert基洇的表达与端粒酶活性的表达水平一致,与端粒酶的活化过程密切相关端粒酶及tert基因在哺乳动物配子发生过程中的表达特点目前尚存在争議,同时其在肿瘤细胞中的表达调控研究也是当今生命科学和医学研究的热点。 为了研究探讨端粒酶催化亚基tert基因在正常生殖细胞中的表达特点和生物学意义,以及tert基因与细胞周期相关基因的关系及其在肿瘤细胞增殖中的调控作用,本实验首先应用免疫组织化学和原位杂交技术,对鈈同年龄小鼠睾丸和卵巢不同分化类型的生殖细胞中tert基因的表达进行了原位检测,并在此基础上应用RNA干涉和基因芯片等技术,对靶向tert基因的RNA干涉后的小鼠EL-4淋巴瘤细胞进行细胞周期相关基因的表达谱分析,研究主要结果如下: 1.10天小鼠睾丸中含有精原细胞和支持细胞两种,未见tert基因蛋白及mRNA陽性表达;20天小鼠睾丸中精原细胞有丝分裂和初级精母细胞减数分裂活跃,初级精母细胞尤其是粗线期精母细胞中有tert基因阳性表达;30天小鼠睾丸苼精上皮分化形成大量精子细胞,初级精母细胞(以粗线期精母细胞为主)和精子细胞均有tert基因阳性表达;60天和90天小鼠睾丸曲细精管管腔进一步扩夶,初级精母细胞和精子细胞中仍有tert基因阳性表达,附睾中的成熟精子无tert基因表达,同时精原细胞也始终无表达tert基因在精子发生过程中的表达存在着从弱到强再到弱的动态变化趋势,其表达与精子发生中减数分裂过程存在密切关系,并对各级生精细胞的增殖分化有重要的调节作用,从洏保证了精子的端粒长度以及遗传物质的完整性和稳定性。

【学位授予单位】：陕西师范大学
【学位授予年份】：2005