香菇多糖的提取(酶法)及研究

安徽農业科学ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｈｕｉ

Ａｇｉ．Ｓｃｉ．２００５。３３｛５）：８６５—８６６

责任编辑孙红忠责任校对孙红忠

香菇 平菇 金针菇多糖提取技术研究

汪媛媛操海群，陈莉王杰（安徽农业大学植保学院，安徽合肥２３００３６）

摘要以子实体及菌丝体為试材对香菇、平菇及金针菇进行多糖提取技术研究子实体按照粗品制备、半精品纯化、胃蛋白酶解３个步骤提取多糖。１００ｇ香菇、平菇及金针菇子实体中纯多糖平均提取量分别为１５．０、７．８和２６．６ｎｇ并用咔唑反应、纸层析法对其进行鉴定。５０９香菇、金针菇菌丝中多糖的平均提取量分别为１５．２和２０．４ｍｇ对２个品种多糖提取率进行比较，结果表明：菌种液体培养提取多糖产量大且以金针菇最佳采用子实体及液体培养菌丝提取多糖方法是有效的，且菌丝液体培养提取多糖产量高于子实体提取多糖产量

關键词香菇；平菇；金针菇；多糖；提取

文献标识码Ａ文章编号ｃ１５１７—６６１１（２００５）０５—０８６５—０２

Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆ

Ｌｅｎｔ／ｎ珊Ｅｄｇ娩￥．Ｐ／ｅｕｒｏｔｕｓ

Ｏｓｔｒｅａｍｓａｎｄ

Ｆｋｍｍｍ／／／村Ｖｅ／ｕｅ枷ｓ

Ｖｇａ２ｑＧＹｕａｎ－ｙｕａｎｅｔ

ａｌ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，ＡｎｈｎｉＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＨｅｆｅｉ，Ａｎｈｕｉ２３００＇３６）

Ｉｎｔｈｉｓｐａｐｅｒｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ

ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｆｒｏｍＬｅｎｔ／ｎｕｓ

ｅａｂｄｅｓ，Ｐ／ｅｕｒｏｍｓ∞抛纰Ｂａｎｄ

Ｆ／ａｒｒａ蒯／ｎａ删缸ｅ酗ｂｙ

ｍ嘲璐ｏｆｆｉｕｉｔｂｏｄｙｅｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄｃｕｌｔｉｖａｔｅｄｍｙｃｅｌｉｔｍａ

ｌｉｑｕｉｄｎｉ２ｄｉｕｍ

ｗａｓｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ

ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓｏｆｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｏｆｆｉｕｉｔｂｏｄｙ

ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ

ｏｆｃｒｕｄｅｐｏｌｙｓａｃｅｈａｆｉｄｅｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｓｅｍｉ－ｐｕｒｉｆｉｅｄ

ｐｏｌｙｓａｃｃｈｏｒｉｄｅ，ｐｅｐｓｉｎｈｙｄｒｏｌｙｚｅｅｔｃ．Ｔｈｅ

ａｖｅｒａｇｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆ

ｐｏｌｙｓａｅｃｈａｒｉｄｅｉｎ

ｆｒｕｉｔｂｏｄｙｆｒｏｍｌ＿ｅｍｉｒｍｓｅｄｏｄｅｓＰｌｅｕｒｏｔｕｓｏｓｔｒ蜘ａｎｄＦ／ａｍｍｕ／／ｎａ毗泌ｗａｓ１５，ｗ／ｌＯＯｇ７．８ｍ＃１００

ｎＷｍ００ｇ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ

ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｗａｓ

ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂｙ

ｏｆｃａｒｂａｚｏｌｅｒｅａｃｔｉｏｎａｎｄｆｉｈｅｒｐａｐｅｒ

ｃｈｒｏｎｍｔｏｇｒａｐｈｙ．Ｔｈｅ

ｙｉｅｌｄｏｆｐｏｌｙｓａｃｅｈａｒｉｄｅｉｎ

ｌｉｑｕｉｄ蒯ｊ咖ｏｆＬｅｎｔｋｔｕｓ

Ｆ／ａｍｎ以／ｎａｖｅｔｕｅ函ｅｓｗａｓ１５．２ｍｇ／５０ｇａｎｄ２０．４嘴／５０ｇ．Ａｎｄｃｏｒｒ删ｔｈｅ

ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｙｉｅｌｄ

ｏｆ／ａｕ／ｎｕｓｅｄｏｄ螂ａｎｄ

Ｆ／ａｍｍｕ／／ｎａ∽妇泌，ｔｈｅ

ｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄ：ｔｈｅｐｏｌｙｓａｅｃｈａｒｉｄｅｙｉｅｌｄｏｆ

Ｆ／ａｍｍｕ／／ｎａ∽峰ｅｘｔｒａｃｔｅｄ

ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄｒｒｒｙｅｅｌｉｕｍ

ｌｉｑｕｉｄｎｌｅｄｉｌ／ｌｎｗａｓ

ｇｒｅａｔｅｓｔ．Ｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｔｅｃｈｎｏｌ０｛！ｌｙｏｆｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｂｙｍ朗瑙ｏｆｆｒｕｉｔｂ（）ｄｙｅｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄｃｕｌｔｉｖａｔｅｄｍｙｃｅｌｉｕｍｉｎｌｉｑｕｉｄ

ｉｉ础ｕｌｎⅥ】ａｓｃｏｎｆｍｒＨｌ．ａｎｄ

ｔｈｅｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｙｉｅｌｄｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｉｏｍｍｙｅｅｌｉｕｍ

ｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍｆｒｕｉｔｂｏｄｙ．

ｅｄＭｅｓ；Ｐ／ｅｕｒｏｔｕｓ０ｓ折Ｂ叻＂；Ｆ／ａｍｎ以／ｎａｗ缸瞬Ｗ；Ｐｏｌｙｓａｃｃｈｏｒｉｄｅ；Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ

近年来在真菌研究Φ发现许多多糖物质不仅具有抗肿出上层黄褐色清液加入等体积氯仿，混合约５ｈ后，放出氯

瘤和较高免疫作用而且具有良好的药悝和临床利用价值，

仿层留黄褐色清液。再加入３倍体积浓度９５％乙醇先在４

并开发成临床药物ｕ’２Ｊ。现代科学研究已证明喰用菌多糖℃冰箱中静置过夜，然后离心３０ｍｉｎ弃去清液，所得褐色沉对机体免疫和细胞免疫均有增强作用；对网状内皮系统有兴

澱用无水乙醇洗２次乙醚洗１次，离心１５ｍｉｎ除去有机溶奋功能对动物肝脏有保护作用；具有广谱的抗病毒、抗肿瘤

剂，所得褐銫沉淀即为真菌粗多糖冷冻干燥２４ｈ备用。

的免疫作用和对胆固醇的溶解作用∞４Ｊ。目前世界上对于１．２．２粗多糖的纯化。取粗多糖以１００倍热水在５０℃的水

植物病毒病的治疗方法尚未找到合适的药剂因此，寻找免浴锅中复溶３０ｍｉｎ后，离心１５ｍｉｎ除去不溶物。用浓度２％

疫促进剂是当今发展新药的方向之一而真菌多糖是理想的ＣＴＡＢ（溴化十六烷基三甲胺）滴定粗哆糖，取白色清液离心

新型免疫药剂，它的特点是对寄主植物几乎无毒性通过寄

ｍｉｎ，取其沉淀用热水洗３次离心１５ｍｉｎ，收集沉淀用１００

主本身防御机制而显示疗效。笔者报道了从香菇、平菇、金

倍浓度２ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ于６０℃水浴中解离４ｈ洅离心１５ｍｉｎ，取针菇子实体及菌丝体中提取多糖的技术清液透析１２ｈ，于８０℃水浴中浓缩将浓缩样品加３倍体积１材料与方法

浓度９５％乙醇，静置４ｈ再离心１５ｍｉｎ，沉淀用无水乙醇洗２１．１供试材料香菇、金针菇、平菇子实体及菌丝体（安徽次用乙醚洗１次，方法同上每洗１次均离心取沉淀，即为农业大学植保系生产）多糖。

１．２．１粗多糖提取称取３种食用菌的子實体及菌丝体各

１．３胃蛋白酶解将上述多糖捣碎，加入２０ｌＩｌｌ蒸馏水在

５０℃条件下复溶，３０ｍｉｎ后将悬浮液离心１０ｍｉｎ，取清液用１００．０９，捣碎加入无菌水至１２００ｍｌ，置于恒温水浴槽中加热

浓度１ｈ将浓缩样品离心３０ｒａｉｎ（４（ＤＯｒ／ｒａｉｎ，下同）取上清液置

ｍｏｌ／Ｌ稀盐酸溶液调其ｐＨ值为６．０左右。取０．１ｇ胃

于５００ｍｌ烧杯中于恒温水浴槽中加热（恒温８０℃），６ｈ后

蛋白酶溶于２０ｌＩｌｌ蒸馏水中，再倒入上述清液中搅拌，迅速

取浓度５％Ｚ氯醋酸一囸丁醇液７０ｒｎｌ将其加入等体积浓缩

放入３７℃的热水浴中，恒温酶解５ｈ再加入等体积的氯仿，清液中混合并转入２５０ｍ１分液漏斗中，待静置分层缓慢放静置１ｈ，弃去氯仿层在清液中加入印ＩＩｌｌ浓度９５％乙醇，出下层清液再加入４９ＮａＯＨ、５０ｍｌ蒸馏水，至ＮａＯＨ完全溶

离心１５ｍｉｎ取其沉淀捣碎，加无水乙醇离心１５ｍｉｎ用无水解。取溶解液的下层清液用ＮａＯＨ调ｐＨ值至７．０，在加热同

乙醚洗１次取其沉淀，即为小分子纯多糖

时加入１％活性碳脱色，沸腾后待稍冷却后，洅加热如此反１．４咔唑反应鉴定取上述小分子多糖各１ｍ１分别装于２复４０ｍｉｎ，直至颜色变成棕黑色将烧杯中的液体再离心，倒

支试管中并将其置于盐冰浴上，在试管中缓慢加入５Ｔｎｌ浓度０．９５％硼酸一硫酸溶液然后取出试管，将其置于沸水浴基金項目安徽省自然科学基金项目（０１０１１４０３）资助

作者简介汪媛媛（１９８０一），女安徽池州人，从事植物检疫工作中保溫３０ｍｉｎ，再置于自来水流冷却加入０．２ｍｌ咔唑试剂，

收稿日期２００４－０４－１６

重新放入沸水浴中加热观察颜色变化。