500多只手工捏制的“泰迪熊兵马俑”亮相，俏皮可爱。
超豪华游轮总造价约合人民币75亿，可搭乘8500名游客。
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客服邮箱：以10倍稀释,标准曲线CT值相差&3,扩增效率&100％，怪了?(扩增效率,标准曲线,绝对定量,探针) - PCR实验 - 生物秀
标题: 以10倍稀释,标准曲线CT值相差&3,扩增效率&100％，怪了?(扩增效率,标准曲线,绝对定量,探针)
摘要: [以10倍稀释,标准曲线CT值相差&3,扩增效率&100％，怪了?(扩增效率,标准曲线,绝对定量,探针)] 我作绝对定量，用探针法，质粒倍比稀释，标准曲线还过的去，就是扩增效率大于100％，，请大家指正。附图1 关键词:[扩增效率 标准曲线 绝对定量 探针 质粒]……
我作绝对定量，用探针法，质粒倍比稀释，标准曲线还过的去，就是扩增效率大于100％，，请大家指正。附图1
图2标准曲线图图3扩增效率图图3扩增效率图在理论上，PCR的扩增效率是100%，即以2的指数扩增，稀释倍数为10倍时，至少要见间隔3.3个循环，即2的3.3次方=10，小于这个值在理论上不对，不知道为什么楼上的曲线为什么间隔小于3.3，这样效率就&100%了。
楼上的倍比稀释应该很准确，没问题这种事情是时有发生的。理论上以十倍浓度梯度稀释Ct制应该相差3.3，但实际上操作起来，人为稀释可能带来误差。另外，像阈值的选择是手动还是自动，都有可能使Ct值变化。最后，软件计算的Slope也只是计算而已，也会带来误差。像你的10-4和10-5间的间隔就有近4个循环。总的来说，结果不错1，减少标准曲线的点。5个点就够了，只要目的基因的拷贝在这些点的范围内就可以。2，第一点的浓度太高了。15cycle后出现信号比较好，而且目的基因一般没有那么多的拷贝，可以考虑更高的稀释比作为开始。我用过200ng的质粒，稀释10，000倍后作为第一个点3，每个点测量3次。我每次用15个孔来确定标准曲线，5个点，每个三次，可以达到稳定可重复的结果。4，改变Threshold，可以得到更好的结果。
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