正己醇降解菌的分离筛选、分类鉴定及其基本特性研究--《西北农林科技大学》2009年硕士论文
正己醇降解菌的分离筛选、分类鉴定及其基本特性研究
【摘要】：
正己醇是广泛存在于一些风味食品中的高级醇类。过量的正己醇会对食品风味产生不良影响,并对人体造成危害。论文旨在从自然界中寻找能够有效降解正己醇的生物酶类及其微生物菌种,从而为进一步研究利用提供基础。论文研究了苹果、大豆和酿酒酵母的粗酶系对正己醇的降解效果;以苹果园土壤、苹果渣、苹果酒醪和醋醅为分离源,采用富集培养和紫外线定向诱变,从自然界中分离筛选正己醇降解菌,并综合其形态学特征、生理生化特征和分子生物学特性对其进行了分类鉴定,研究了其在液体培养条件下的生长特性和对正己的降解特性。所得主要研究结果如下:
(1)来自于苹果的粗酶系、大豆的脂肪氧化酶粗酶和酿酒酵母脱氢酶粗酶均对正己醇含量的减少具有一定的作用,其中苹果中的粗酶对正己醇的降解率均较高;苹果储存期和酶的提取方法对苹果粗酶系降解正己醇的能力无显著影响。
(2)分离得到两株能在pH3.8～4.0范围内有效降解正己醇的菌株TF和TM,它们在马铃薯葡萄糖培养液中对4.0mg/mL正己醇的降解率分别为45.60±5.43%和23.82±9.27%,与对照在α=0.01水平上差异显著。两者在降解正己醇方面存在一定的协同效应。
(3)菌株TM属于地霉属Geotrichum,菌株TF为白地霉Geotrichum candidum(有性型Galactomyces geotrichum)。
(4)菌株TM和TF在液体静置培养过程中的菌体生长符合典型的对数生长规律,并会导致培养液pH发生规律性变化;在液体振荡培养过程中,菌体生长量很快达到最大值,但菌体生长和培养液pH的变化均无明显规律可循。
(5)菌株TM和TF在液体静置培养过程中产生的挥发性香气成分主要为酯类,且大部分属于水果特征香气。但是,菌株TM菌产生的挥发性化合物中含有占总体积12.09%的二甲胺,而二甲胺有一定动物毒性。因此,菌株TF在食品加工中的应用价值更高。
【关键词】：
【学位授予单位】：西北农林科技大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2009【分类号】：TS201.2【目录】：
ABSTRACT5-11
第一章 文献综述11-27
1.1 正己醇的理化性质及潜在危害性11-12
1.1.1 正己醇的理化性质11
1.1.2 酒中正己醇的危害性11
1.1.3 正己醇的生理毒性11-12
1.2 正己醇存在的广泛性12-14
1.2.1 植物材料中的正己醇12
1.2.2 水果中正己醇12-13
1.2.3 果汁中的正己醇13
1.2.4 肉类中的正己醇13
1.2.5 酒精饮料中的正己醇13
1.2.6 微生物及其发酵产品中的正己醇13-14
1.2.7 其它食品中的正己醇14
1.3 正己醇的生物形成途径14-17
1.3.1 酵母细胞中正己醇的分解代谢产生途径15
1.3.2 植物体内正己醇的分解代谢产生途径15-16
1.3.3 酵母细胞中正己醇的合成代谢产生途径16
1.3.4 植物体内正己醇的合成代谢产生途径16-17
1.4 正己醇降解方法的研究综述17-20
1.4.1 化学途径17-18
1.4.2 生物酶转化途径18-20
1.4.3 微生物降解途径研究现状20
1.5 正己醇的提取与检测方法研究现状20-23
1.5.1 正己醇的提取方法20-21
1.5.2 正己醇的检测方法研究现状21-23
1.6 相关方法的研究现状23-24
1.6.1 粗酶的提取方法23-24
1.6.2 微生物的分离筛选方法24
1.6.3 微生物的分类鉴定方法24
1.7 本文的研究目的和意义24-25
1.8 本文的研究内容25-26
1.9 研究的技术路线26-27
第二章 正己醇降解酶源的筛选27-35
2.1 试验材料27-28
2.1.1 原料27
2.1.2 主要试剂27
2.1.3 主要仪器和设备27-28
2.2 试验方法28-30
2.2.1 粗酶的提取28-29
2.2.2 粗酶体系中蛋白质浓度的测定29
2.2.3 正己醇降解反应所用底物体系29
2.2.4 正己醇的酶降解试验29-30
2.2.5 正己醇含量的检测及正己醇降解率的计算30
2.2.6 数据分析方法30
2.3 结果与分析30-33
2.3.1 蛋白质标准曲线30-31
2.3.2 粗酶液蛋白质浓度31-32
2.3.3 正己醇酶解效果32-33
2.4 讨论与小结33-35
2.4.1 讨论33-34
2.4.2 小结34-35
第三章 正己醇降解菌的分离、筛选35-42
3.1 试验材料35-36
3.1.1 微生物分离源35
3.1.2 培养基35-36
3.1.3 主要试剂36
3.1.4 主要仪器设备36
3.2 试验方法36-38
3.2.1 正己醇降解微生物的富集36
3.2.2 正已醇降解菌的初筛36
3.2.3 正己醇降解菌的复筛36-38
3.2.4 正己醇降解菌的纯化38
3.2.5 纯化后的菌对正己醇的降解能力试验38
3.3 结果与分析38-40
3.3.1 正己醇降解菌的初筛38
3.3.2 正己醇降解菌的复筛结果38-39
3.3.3 正己醇降解菌的纯化39
3.3.4 纯化后的菌对正己醇的降解效果39-40
3.4 讨论与小结40-42
3.4.1 讨论40-41
3.4.2 小结41-42
第四章 正己醇降解菌的分类鉴定42-52
4.1 试验材料42-43
4.1.1 菌种42
4.1.2 培养基42
4.1.3 主要试剂42
4.1.4 主要仪器设备42-43
4.2 菌种分类鉴定方法43
4.2.1 形态学鉴定43
4.2.2 生理生化鉴定43
4.2.3 26S5 rDNA D1/D2 区及ITS 区序列分析43
4.2.4 系统发育分析43
4.3 菌株鉴定结果与分析43-50
4.3.1 菌株形态学特征43-44
4.3.2 菌株生理生化特性44-47
4.3.3 菌株的分子生物学鉴定结果47
4.3.4 系统发育分析47-50
4.4 讨论与小结50-52
4.4.1 讨论50-51
4.4.2 小结51-52
第五章 地霉属对正己醇的降解特性52-61
5.1 试验材料52
5.1.1 菌种52
5.1.2 培养基52
5.1.3 主要试剂52
5.1.4 主要仪器设备52
5.2 试验方法52-54
5.2.1 菌株TM 和TF 在PDB 中静置培养中的生长特性52-53
5.2.2 菌株TM 和TF 在PDB 中摇床培养中生长特性53
5.2.3 菌株TM 和TF 菌在PDB 中的正己醇降解曲线53
5.2.4 菌株TM 和TF 在液体静置培养中产生的香气成分分析53-54
5.3 结果与分析54-59
5.3.1 菌株TM 和TF 在液体静置培养过程中的生长特性54
5.3.2 菌株TM 和TF 在液体摇床培养中的生长特性54-55
5.3.3 菌株TM 和TF 在液体静置培养中的正己醇降解曲线55-57
5.3.4 菌株TM 和TF 在液体静置培养中产生的产香气成分57-59
5.4 讨论与小结59-61
5.4.1 讨论59
5.4.2 小结59-61
第六章 讨论与结论61-63
6.1 讨论61
6.2 结论61-63
参考文献63-70
作者简介71
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京公网安备75号猜谜语大全及答案三十六种动物
你大爷HuAi
001●一个黑孩,从不开口,要是开口,掉出舌头.【谜底】瓜籽002●五个兄弟,住在一起,名字不同,高矮不齐.【谜底】手指003●人脱衣服,它穿衣服,人脱帽子,它戴帽子.【谜底】衣帽架004●屋子方方,有门没窗,屋外热烘,屋里冰霜.【谜底】冰箱005●两只小口袋,天天随身带,要是少一只,就把人笑坏.【谜底】袜子006●弟兄七八个,围着柱子坐,只要一分开,衣服就扯破.【谜底】蒜007● 身穿大皮袄,野草吃个饱,过了严冬天,献出一身毛.【谜底】绵羊008●独木造高楼,没瓦没砖头,人在水下走,水在人上流.【谜底】雨伞009●一个小姑娘,生在水中央,身穿粉红衫,坐在绿船上.【谜底】荷花010●颜色白如雪,身子硬如铁,一日洗三遍,夜晚柜中歇.【谜底】碗011●有面没有口,有脚没有手,虽有四只脚,自己不会走.【谜底】桌子012●白嫩小宝宝,洗澡吹泡泡,洗洗身体小,再洗不见了.【谜底】香皂013●身穿绿衣裳,肚里水汪汪,生的子儿多,个个黑脸膛.【谜底】西瓜014●不怕细菌小,有它能看到,化验需要它,科研不可少.【谜底】显微镜015●是笔不能画,和电是一家,要知有无电,可去请教它.【谜底】测电笔016● 象只大蝎子,抱起似孩子,抓挠肚肠子,唱出好曲子.【谜底】琵琶017●圆筒白浆糊,早晚挤一股,兄弟三十二,都说有好处.【谜底】牙膏018●上不怕水,下不怕火；家家厨房,都有一个 (打一生活用品).【谜底】锅019●一个老头,不跑不走；请他睡觉,他就摇头 (打一物).【谜底】不倒翁020●大姐用针不用线,二姐用线不用针,三姐点灯不干活,四姐做活不点灯.(打四种动物)【谜底】蜜蜂,蜘蛛,萤火虫,纺织娘021●驼背公公,力大无穷；爱驮什么 车水马龙(打一物).【谜底】桥022●头戴红帽子,身披五彩衣,从来不唱戏,喜欢吊嗓子(打一动物).【谜底】公鸡023●先修十字街,在修月花台,身子不用动,口粮自动来(打一动物).【谜底】蜘蛛024●有头没有颈,身上冷冰冰,有翅不能飞,无脚也能行(打一动物).【谜底】鱼025●身披花棉袄,唱歌呱呱叫,田里捉害虫,丰收立功劳(打一动物).【谜底】青蛙026●大姐长的真漂亮,身穿桔红花衣裳.七颗黑星上面镶,爱吃蚜虫饱肚肠.二妹最爱嗡嗡唱,百花园里忙又忙.后腿携带花粉筐,装满食品喂儿郎.三姐身披黄衣裳,腰儿细来腿儿长.飞到田间捉害虫,尾巴毒针塞刀枪.(打三益虫) .【谜底】瓢虫,蜜蜂,黄蜂(马蜂)027●头小颈长四脚短,硬壳壳里把身安,别看胆小又怕事,要论寿命大无边.(打一动物).【谜底】龟028●一物长来真奇怪,肚皮下面长口袋,孩子袋里吃和睡,跑得不快跳得快.(打一动物).【谜底】袋鼠029●耳朵像蒲扇,身子像小山,鼻子长又长,帮人把活干.(打一动物).【谜底】大象030●八只脚,抬面鼓,两把剪刀鼓前舞,生来横行又霸道,嘴里常把泡沫吐.(打一动物).【谜底】螃蟹031●四蹄飞奔鬃毛抖,拉车驮货多面手,农民夸它好伙伴,骑兵爱它如战友.(一动物).【谜底】马032●头像绵羊颈似鹅,不是牛马不是骡,戈壁滩上万里行,能耐渴来能忍饿.(一动物).【谜底】骆驼033●说它是虎它不像,金钱印在黄袄上,站在山上吼一声,吓跑猴子吓跑狼.(一动物).【谜底】金钱豹034●身穿皮袍黄又黄,呼啸一声百兽慌,虽然没率兵和将,威风凛凛山大王.(一动物).【谜底】虎035●黑夜林中小哨兵,眼睛限像两盏灯,瞧瞧西来望望东,抓住盗贼不留情.(一动物).【谜底】猫头鹰036●头戴大红花,身穿什锦衣,好象当家人,一早催人起.(一动物).【谜底】公鸡037●嘴像小铲子,脚像小扇子,走路左右摆,水上划船子.(一动物).【谜底】鸭038●身体肥,头儿大,脸儿长方宽嘴巴,名字叫马却没毛,常在水中度生涯.(一动物).【谜底】河马039●一物像人又像狗,爬杆上树是能手,擅长模仿人动作,家里没有山里有.(一动物).【谜底】猴040●身子像个小逗点,摇着一根小尾巴,从小就会吃孑孓,长大吃虫叫哇哇.(一动物).【谜底】蝌蚪041●唱歌不用嘴,声音真清脆,嘴尖像根锥,专吸树枝水.(一动物).【谜底】蝉042● 小小姑娘满身黑,秋去江南春来归,从小立志除害虫,身带剪刀满天飞.(一动物).【谜底】燕子043●背着包袱不肯走,表面坚强内里柔,行动迟缓不拖拉,碰到困难就缩头.(一动物).【谜底】螺丝
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